Состав грунтовки: Срок регистрации домена tvoyprorab.com истёк

Содержание

Какие бывают грунтовки, для чего нужны и как их выбрать

Грунтовки: виды, способы применения, выбор лучших марок

Грунтование является одним из обязательных подготовительных процессов перед проведением декоративно-отделочных работ. На рынке представлено много разновидностей грунтовок. Неправильный выбор состава может негативно сказаться на эксплуатационных качествах отделки. Поэтому важно понимать, какая грунтовка для чего может быть использована.

Все представленные грунты на рынке можно объединить в три основные категории, а именно:

Выбор производителя и марки грунта должен отталкиваться именно исходя из того, к какой категории относится состав. В данной публикации предлагаем ознакомиться с характеристиками, назначением, свойствами и способами применения разных видов грунтовок. Ведь, казалось бы, такой не очень существенный процесс, как грунтование, может повлиять на эксплуатационные свойства конкретного материала и качество ремонта в целом.

Грунтовка глубокого проникновения

Грунтовка глубокого проникновения представляет собой полимерно-водный раствор. Его основное назначение заключается в укреплении рыхлых (слабых), пористых, сильно впитывающих оснований для последующего проведения отделочных работ.

Принцип действия грунтовки глубокого проникновения достаточно простой. В состав этого готового для нанесения грунта входит акрил и стирол в разбавленном виде. При нанесении, вместе с водой в поверхностную структуру основания попадают и сами полимеры. После полного испарения воды из основания, внутри остается только сухое вещество. Во время высыхания акрил на молекулярном уровне связывается с материалом стен, полов или потолков. Таким образом обеспечивается обеспыливание, укрепление поверхностного слоя и выравнивание влаговпитывающей способности основания.

Для последующего проведения работ важно дождаться полного высыхания грунта. В ином случае полимер не сможет связаться с материалом и эффекта не будет. В зависимости от условия окружающей среды (температура и влажность), один слой высыхает на протяжение от 1-2 до 6 часов. Многие специалисты проводят отделку только лишь на следующий день после нанесения грунта.

Наносится грунтовка глубокого проникновения от 1 до 2 слоев. Не рекомендуется делать больше слоев, так как появляется риск «перегрунтовать» основание. Большое количество полимера в структуре может негативно сказаться на влагопоглощении, что приведет к снижению адгезии с штукатурными растворами и клеевыми материалами.

Какие бывают грунтовки глубокого проникновения?

Не все грунтовки глубокого проникновения обладают одинаковыми свойствами. Их особенности напрямую связаны с количеством сухого вещества в растворе. Это определяет назначение и способ использования подобного грунта.

  • Грунтовка Юнис для внутренних работ. Продукт на основе акрилатных смол, который применяется для обработки оштукатуренных, шпаклеванных поверхностей, ячеистого бетона, бетона, гипсовых плит, как ГКЛ, ГВЛ, ПГП и прочих материалов со схожими свойствами. Грунт рекомендуется применять только внутри помещений с нормальным уровнем влажности. Используется для подготовки поверхностей перед оштукатуриванием или покраской.
  • Грунтовка Ceresit CT 17 глубокого проникновения. Достоинством данного продукта является то, что помимо упрочения основания, он дополнительно выравнивает влаговпитываемость. Таким образом, данный грунт может быть использован для более широкого спектра последующих работ – покраска, поклейка обоев, плиточная кладка.
  • Грунтовка Файдал Тифенгрунд морозостойкая. Применяется для обработки минеральных сильновпитывающих оснований, а также рыхлых (но прочно удерживающихся), мелящихся, пачкающихся поверхностей. Ее особенности заключаются в высоком процентном содержании сухого вещества (12%) и способности проникать на глубину до 10 см в структуру стены. За счет этого продукт обеспечивает дополнительную клеящую способность. Допускается применение данного состава для подготовки фасадов и внутренних помещений под цементные и штукатурные растворы.
  • Грунтовка ЕК G100 концентрированная – это концентрат, который позволяет мастеру самостоятельно приготовить раствор исходя из состояния поверхности. Эта марка грунта отлично подойдет для тех, кто планирует масштабный ремонт в местах, где будут проводиться штукатурные, малярные, оклеечные работы, заливка полов и прочее.

Грунтовки универсальные

Универсальная грунтовка применяется с целью снижения и выравнивания влагопоглощения стен при проведении отделочных мероприятий. Зачастую, такие составы не обладают другими уникальными свойствами, хотя возможны и исключения. Примеры таких исключений приведем далее.

Универсальными этот вид грунтовок называется потому, что обрабатывать ими допускается поверхности для последующего проведения большинства видов работ. К таким относятся:

  • монтаж плитки на клей;
  • нанесение гипсовых или цементных штукатурок;
  • подготовка поверхностей для стяжек и наливного пола;
  • покраска любыми видами ЛКМ;
  • поклейка обоев.

Универсальная грунтовка, обладая свойством выравнивания влаговпитываемости поверхности, обеспечивает полезные свойства, как:

  • повышенное время работы с растворами при монтаже керамической плитки, штукатурок и шпаклевок на сильно впитывающие основания;
  • снижение расхода краски при окрашивании поверхностей;
  • не дает обойному клею быстро сохнуть на стене и повышает время для нанесения полотна.
  • дополнительно такой грунт может укреплять поверхностный слой, обеспыливать основание, улучшая тем самым адгезию с растворами.

Универсальные грунтовки отлично подходят для работы с сильно впитывающими материалами. Они идеальны для обработки пенобетона, газосиликата и других ячеистых бетонов. На обработанную поверхность намного легче ложится штукатурка (особенно гипсовая). В ней происходит полная гидратация, что обеспечивает отсутствие образования трещин во время последующей эксплуатации.

Примером качественных универсальных грунтовок являются:

  • Грунтовка ЕК G200 универсальная. Акриловая грунтовка, которая отлично выравнивает влаговпитываемость пористых материалов. Рекомендована для подготовки стен под тонкослойное оштукатуривание, поклейку обоев, а также подготовку стяжек под заливку самонивелирующимися смесями.
  • Грунтовка Юнис универсальная. Состав для подготовки стен из ячеистого бетона и материалов на основе гипса под последующую кладку плитки или штукатурки на основе гипса, цемента. Особенность этой продукции в наличии в составе полимеров, которые повышают адгезию. Допускается использовать даже для грунтования деревянных поверхностей под покраску, в частности, плит ДСП, МДВ, ДВП и прочих.
  • Грунтовка Кнауф Миттельгрунд F. Концентрированная универсальная грунтовка со специальным свойством – морозостойкость. Этот грунт допускается применять внутри помещений на промерзающих стенах. Идеально подходит для пено и газоблока, силикатного кирпича. Также может применяться для обработки листов на основе гипса, кирпича, по цементной стяжке перед нанесением наливного пола. Этот грунт допускается разбавлять в пропорции до 1 к 5, что обеспечивает оптимальный выход продукта. 

Бетоноконтакт: свойство грунта и его применение

Бетоноконтакт – это особый вид грунтовочных составов, который в последнее время приобрел широчайшее применение. Данный материал производится на основе дисперсии акрилатных смол с добавлением минеральной крошки. После нанесения на поверхность и высыхания, он образует своеобразную пленку. Поверхность этой пленки укрыта мелкими твердыми частичками, которые создают эффект шероховатости.

Обычно бетоноконтакт окрашивают в розовый цвет. Сделано это для того, чтобы легче визуально определять, загрунтован ли участок полностью или есть на нем пробелы. Наличие любых пробелов на обработанной поверхности может негативно сказаться на эффективности грунтовки.

Многие считают, что грунтовка бетоноконтакт универсальная и может использоваться на любых типах поверхностей и для любых последующих работ. Это утверждение является ошибочным. Главное назначение материала заключается в следующем:

Бетоноконтакт – грунтовка, которая предназначена исключительно для подготовки слабовпитывающих оснований для последующего нанесения штукатурки.

К числу слабовпитывающих оснований относится монолитный бетон, встречающийся в панельных домах. Также допускается наносить бетоноконтакт на старую краску, если удалить ее с поверхности любым способом невозможно. Эффективен будет этот грунт для обработки плит перекрытия с целью подготовки потолков под тонкослойное оштукатуривание.

На загрунтованную бетоноконтактом поверхность допускается наносить любые виды цементных или гипсовых штукатурок. Причем, наилучшим образом бетоноконтакт ведет себя именно с растворами на гипсовой основе. Причин этому, как минимум, есть две:

  • снижение водопоглощения стен практически до нулевой отметки;
  • придание обработанной поверхности шероховатости.

Гипсовые штукатурки быстро отдают влагу. При нанесении толстым слоем это свойство может привести к неравномерному водопоглощению по структуре штукатурки. Она начнет, банально, «сползать» со стен еще до полного сцепления с поверхностью. Водонепроницаемая пленка бетоноконтакт позволяет избежать образования такого эффекта. А дополнительные крупицы минеральной крошки на поверхности обеспечат дополнительное сцепление с гипсом.

Бетоноконтакт – это паропроницаемая грунтовка. Это также важный фактор при выборе материалов для отделки жилых помещений. За счет данного свойства грунт не будет препятствовать стенам «дышать». Он не будет первопричиной появлению под штукатуркой грибков и плесени.

Какую грунтовку бетоноконтакт покупать?

Хорошая грунтовка бетоноконтакт должна иметь надлежащее качество: иметь достаточное содержание полимеров в составе и четкую пропорцию минеральных наполнителей. Мы же рекомендуем использовать следующие виды бетоноконтакта:

  • Грунтовка бетонконтакт Ceresit CT 19. Это высококачественный грунт с добавками кварцевого песка. Обеспечивает силу сцепления со слабовпитывающими основаниями до 1,5 МПа. Один из немногих грунтов, который рекомендован производителем под последующую укладку керамической плитки. Продукт является морозостойким, поэтому допускается его использование снаружи зданий на вертикальных поверхностях. Идеально подходит для последующего оштукатуривания цементными и гипсовыми штукатурками.
  • Грунтовка ЕК Бетонконтакт – состав на основе акрилатной смолы. Легко наносится и быстро сохнет. Существенно повышает адгезию за счет свойств полимерной пленки и кварцевого песка в составе. Рекомендован для монтажа штукатурок и для плиточных работ.
  • Грунтовка Кнауф Бетонконтакт. Акриловая дисперсия с керамическим песком, которая применяется для подготовки гипсовых материалов и ячеистых бетонов под последующее оштукатуривание гипсовыми штукатурками.

Когда лучше не использовать бетоноконтакт?

На практике грунт бетоноконтакт не зарекомендовал себя как идеальный материал для подготовки стен перед кладкой керамической плитки и, тем более, керамогранита. Причина заключается в том, что плиточный клей имеет более высокую адгезивную способность, чем грунт. Сила сцепления плиточных клеев составляет от 0,5 МПа, в то время как у бетоноконтакта она лишь 0,4 МПа (со слабовпитывающими, осыпающимися материалами). Это приводит к снижению прямого сцепления клея с основанием. Ввиду большого веса керамической плитки и керамогранита, они будут создавать увеличенные нагрузки на грунт. В итоге бетоноконтакт может либо расслоиться, либо «сойти» со стены вместе с плиткой.

Во избежание негативного результата для подготовки поверхностей под укладку плитки лучше использовать такие грунтовки как бетонконтакт Ceresit CT 19 или ЕК Бетонконтакт. Производители этих марок рекомендуют именно данные продукты для подготовки стен под плиточные работы.

Не рекомендуется использовать бетоноконтакт любого производителя на рыхлых поверхностях. С подобными основаниями грунт не способен обеспечить заявленную производителем адгезию. Сила сцепления слоя с такими минеральными материалами будет снижена. Учитывая, что адгезия штукатурных растворов составляет от 0,3МПа, эффекта от обработки поверхностей бетоноконтактом не будет.

Нельзя наносить бетоноконтакт на невпитывающие основания – металлические, деревянные или пластиковые поверхности. Слой не сможет нормально сцепиться с подобными основаниями. Даже если это произойдет, то учитывать нужно особое свойство бетоноконтакта – паропроницаемость. Скопление влаги между поверхностью и грунтовкой приведет к очень быстрому сползанию последней.

Резюме: какая грунтовка нужна

Выбор того или иного типа грунта должен основываться на двух факторах – тип основания и вид проводимой декоративной отделки. Наши рекомендации следующие:

  1. Грунты глубокого проникновения будут эффективные только на стенах с «сыпящимся» и «мелящимся» эффектом. Их задача заключается в укреплении поверхностного слоя материала, связывания его структуры. Это позволяет увеличить надежность самого основания и повысить адгезию с растворами.
  2. Грунты универсальные подойдут для проведения отделочных работ, где важно уменьшить влаговпитываемость поверхностей. К примеру, для обработки пено-, газобетона, силикатных блоков, при монтаже керамической плитки или поклейки обоев. Загрунтованная поверхность способствует гидратации штукатурки, дает больше времени на выравнивание плитки по уровню или состыковки полотен.
  3. Грунты Бетоноконтакт лучше использовать при монтаже цементных и гипсовых штукатурок и только на слабовпитывающих основаниях. В другом случае существенного эффекта вы не добьетесь, а иногда даже можно усугубить ситуацию.

Грунты не являются панацеей, которая обязательно должна гарантировать великолепный результат. Грунты – это, прежде всего, вспомогательное средства, которые упрощают процесс монтажа и делают его более качественным и надежным. Главное, при этом, выбирать правильный и подходящий состав и в точности соблюдать технологию монтажа того или иного раствора, клея, краски.

состав, виды и их характеристики

ПОДЕЛИТЕСЬ
В СОЦСЕТЯХ

Правильная грунтовка для стен под обои дает возможность хозяевам лицезреть прекрасную ровную поверхность после проведения ремонта. Любые отделочные работы начинаются с подготовки необходимой рабочей поверхности. Так и стены под поклейку обоев вначале очищают от старого покрытия, затем шпаклюют и наносят грунт. Только после этого на них можно клеить сами обои. Строительная промышленность производит много различных видов грунтовки.

Перед поклейкой обоев стены необходимо прогрунтовать

Грунтовка для стен под обои: состав, виды и их характеристики

Наклейка обоев, как все отделочные работы, нуждается в использовании вспомогательных материалов. Одним из них является грунтовка для стен под обои. Она представляет собой суспензию различной консистенции, которая после перемешивания превращается в однородную массу молочного оттенка. Нанесенная на поверхность стен, она создает сплошную пленку, которая обладает прекрасной адгезией с большинством отделочных материалов.

Состоит грунтовка, главным образом, из органических смол и клеящих компонентов. Образование пленки происходит за счет полимеров из силикатов, латекса, акрила или силикона. В растворе также присутствуют добавки, придающие большую пластичность или текучесть жидкости.

Компании производители обязаны указывать на упаковке ряд параметров, которые необходимо знать пользователю:

  1. Порядок приготовления смеси и ее пропорции.
  2. Средний расход препарата на 1 м².
  3. Способ, которым материал рекомендуют наносить на грунтуемую поверхность.
  4. Время, в течение которого произойдет полное высыхание слоя, нанесенного на стену.
  5. Гарантируемый компанией срок годности и дата производства смеси.

Под светлые обои лучше выбрать прозрачную грунтовку

По общепринятым правилам, грунтовка должна иметь свойства, которые необходимы для ее непосредственного назначения, а именно:

  • в поверхность, которая обрабатывается, состав должен проникать очень глубоко;
  • адгезия соприкасающихся материалов с применением грунтовки должна становиться гораздо выше;
  • поверхностная структура материала при осуществлении грунтовки стен перед поклейкой обоев должна укрепляться;
  • любая грунтовка просто обязана иметь антисептическое и антигрибковое действие;
  • быстрое высыхание – непременный атрибут любой качественной грунтовки.

Осуществляя выбор того или иного типа праймера (так еще иногда называют грунтовочную смесь), необходимо знать следующее:

  • покрываемый материал. Ведь у штукатурки, бетона, гипсокартона и других оснований совершенно разные свойства;
  • уровень влажности в том помещении, где планируется применять праймер;
  • отличается по своему составу грунтовка для простых обоев и для жидких;
  • даже плотность обоев имеет значение при выборе того или иного грунта.

Для работы понадобится малярный валик и пластиковый поддон

Полезный совет! Перед походом в магазин для приобретения грунтовки подготовьте все вышеперечисленные исходные данные. Их необходимо сообщить продавцу, чтобы он подобрал вам самый оптимальный вариант праймера.

Назначение грунтовочных смесей

Нанесение грунтовки для стен под обои обеспечивает наведение порядка на поверхности стен, а также гарантирует создание превосходной подложки под клеевой состав. Раствор глубоко проникает во все имеющиеся поры на стене, скрепляя их и вытесняя оттуда воздух, что предотвратит образование пузырей под обоями. Обеззараживание поверхности происходит посредством того, что в составе грунтовок имеется вещество, которое способно поражать живые микроорганизмы: грибы, плесень и бактерии. Праймер создает прекрасную адгезию между стеной и обоями. Особенно это актуально в различных стыках и углах.

Грунтовочные смеси можно наносить на стены с помощью щетки

Пленка, которая создается при нанесении праймера на стены, не позволяет глубоко впитываться клеевому составу, что создает его дополнительную экономию. Кроме того, она делает цвет стены равномерным, что очень критично при наклейке светлых обоев. Смеси обладают свойством немного сглаживать незначительные изъяны в поверхности стен, что делает приклеивание полотен обоев более удобным. При этом, микроклимат в жилище не нарушается, так как стены не прекращают «дышать» после использования грунтовочных смесей.

Какие существуют основные виды праймеров

В настоящее время принято деление всех грунтовок по трем критериям: растворимость, используемый материал и назначение. Если взять критерий растворимости, то химическая промышленность предлагает следующие виды праймеров:

  1. Растворяемые органическими растворителями: алкидами, полиуретаном, латексом.
  2. На водной основе бывают акриловые, силикатные, латексные и силиконовые грунтовки.
  3. На основе природных минералов, таких, как: гипс, цемент или известь.

Выполнить грунтовку стен самостоятельно не составит никакого труда

По используемому в составе грунта материалу можно выделить несколько типов и указать их свойства и предпочтительную поверхность для обработки:

  • алкидный праймер лучше всего подходит для покрытия некоторых металлических и бетонных типов поверхностей, а также деревянных сооружений. Время его высыхания не более 14 часов;
  • акриловые грунтовки находят свое применение на деревянных, оштукатуренных или кирпичных стенах. Могут применяться на поверхностях из ДВП и ДСП. Высыхают за 2-3 часа;
  • полиуретановые хорошо применять на сильно запыленных или плохо впитывающих поверхностях. Время их высыхания составляет около 24 ч;
  • силиконовые праймеры можно обнаружить на бетонных, оштукатуренных или известково-песчаных стенах. Высыхают они не дольше, чем 5 ч;
  • латексная грунтовка для стен под обои подходит хоть для какого типа поверхности, высыхает всего за 2 часа;
  • силикатные и минеральные типы грунтов с успехом наносят на оштукатуренную, кирпичную или бетонную поверхность. Сохнут оба эти типа не менее 24 ч.

Стены грунтуются после их оштукатуривания и шпаклевания

Полезный совет! Совершенно недопустимо обрабатывать силикатной грунтовкой поверхности, содержащие гипс. Они не предназначены для этих целей и ведут к потере прочностных свойств.

По предназначению все праймеры делят на несколько обособленных видов:

  • универсального применения. Они выпускаются на водной основе;
  • имеющие специализированное предназначение: антигрибковые, антибактериальные или антикоррозийные;
  • препараты с глубоким до 15 мм проникновением в поверхность;
  • имеющие изолирующие свойства;
  • так называемый бетонконтакт, позволяющий обеспечивать наилучшую адгезию с бетонными поверхностями.

Грунтовку легко наносить на стену с помощью валика

Грунтовка стен перед поклейкой обоев обычно осуществляется универсальными, алкидными, латексными, акриловыми праймерами или обычным обойным клеем.

Как происходит действие различных видов грунтовочных смесей

Рассмотрим способ применения того или иного вида грунта. Акриловые грунтовки наносят на стены при помощи валика. В местах, где это невозможно, применяют кисть. В зависимости от качества грунтуемой поверхности делают два или один слой. На гипсокартон наносят всегда 2 слоя. Преимущества акрилового вида в его универсальности. Он подходит практически для любых стен.

Полезный совет! С обработанных акриловым грунтом стен очень легко снимать старые обои. Их нужно просто смочить нагретой водой.

Клеить обои можно только после того, так прогрунтованные стены просохнут

Латексную группу часто применяют на разрушающихся поверхностях, так как она способна скреплять частицы вещества. Алкидные праймеры создают влагозащитную пленку и уничтожают плесень. Свойство блокировать ржавчину позволяет этот тип грунтовок применять на железобетонных поверхностях.

Универсальные типы применимы для любой поверхности, что делает их наиболее востребованными. Однако не стоит наносить их на разрушающиеся стены. Для этого лучше выбрать более специфический тип грунта. Грунтовка стен перед поклейкой обоев универсальным праймером гарантирует то, что все требования по качеству работ будут выполнены.

Обзор производителей грунтовочных смесей

На рынке отделочных материалов присутствуют как отечественные, так и зарубежные бренды. Одним из них является Церезит. Под этой маркой поставляется несколько видов грунтовочных смесей, которые очень хорошо себя показали. Отечественный производитель «Скиф-Импекс» выпускает всю линейку грунтовочных смесей для различных целей. Еще один известный производитель – фирма «UNIS», которая также славится высоким качеством продукции.

Производители предлагают различные варианты грунтовочных смесей

Неважно, грунтовку какого бренда выбрать, важно, чтобы состав был качественным и непременно доступным для широкого использования. Использование праймеров для грунтовки стен перед поклейкой обоев сегодня видится обязательным элементом ремонта.

Грунтовка стен перед поклейкой обоев (видео)

ОЦЕНИТЕ
МАТЕРИАЛ Загрузка… ПОДЕЛИТЕСЬ
В СОЦСЕТЯХ

СМОТРИТЕ ТАКЖЕ

REMOO В ВАШЕЙ ПОЧТЕ

экономия и уверенность в качестве

Современные технологии производства могут представить достаточно разнообразный ассортимент грунтовки для пола различного качества, по приемлемой цене и для любого назначения. Но, в определённых ситуациях можно прилично сэкономить деньги и приготовить не самый худший состав своими руками.

Как показывают статистические исследования, наибольшей востребованностью пользуются самодельная акриловая смесь и грунтовка с водозащитными свойствами глубокого проникновения, сделанная на основе ПВА.

Рассмотрим подробнее процессы изготовления этих двух вариантов:

1. Самодельная акриловая грунтовка

Немного окунувшись в историю создания акриловых грунтовок, можно увидеть, что изначально в ней присутствовали всевозможные добавки и пигменты, которые делали её укрывистой по аналогии с настоящей краской. Если покрывать неровный пол такой грунтовкой, то она способна выровнять не только цвет, но и общую структуру.

Для оформления современного декора, такими составами пользуются в основном художественные декораторы для эксклюзивной росписи. Рисунок в помещении, выполненный на светлом тоне подложке, выглядит эффективнее и ярче.

Для классических строительных потребностей подойдёт больше грунтовка без окраски (бесцветная), а создать желаемый тон можно с первым нанесённым слоем краски.

Рецепт акриловой грунтовки своими руками

Основные компоненты, которые входят в состав:

— вода очищенная – 87,10%;

— связующее вещество – 12,0%;

— биоцид – 0,12%;

— коалесцент – 0,49%;

— пеногаситель – 0,29%.

В случае когда связующее вещество не образует пены, то вполне реально можно обойтись без применения пеногасителя. Также, если грунтовку не планируется долго (6–9 дней) хранить, можно не добавлять биоцид, который уничтожает вредителей и бактерии.

Вещество коалесцент обладает свойством понижать минимальное значение температуры, чтобы формировалась плёнка. Когда её значение не больше +6С, его можно не прибавлять в общую массу. Остаётся сделать дисперсию из компонентов и развести нужным количеством воды.

Предположим, нужно загрунтовать определённую площадь пола, который плохо впитывает влагу. Часто, в этом случае, грунтовка собирается в виде толстой плёнки, небольшими пятнами, на поверхности. Такую проблему можно легко исправить путём добавления в состав веществ, обладающим поверхностно-активным действием. Несмотря на сложность формулирования, это довольно легко!

Секрет! К самым лучшим и безопасным поверхностно-активным веществам относится 72% хозяйственное мыло! Есть специальные добавки, но они очень дорогие. Эффективнее использовать мыло, которое стоит копейки!

Мы получили хорошую акриловую грунтовку, которая хорошо держится на обрабатываемой поверхности, из-за хозяйственного мыла.

Хорошо бы улучшить качество и сделать хорошую защиту пола от грибка и плесени следует добавить медный купорос или фунгицид – в итоге проблема решена!

Чтобы подложка лучше впитывала грунтовую смесь, в её основе следует применять связующее вещество с тонкодисперсионной структурой. Только в таком случае можно достигнуть процентного содержания с 13% до 52%.

Суммируя все новые различия, получается ИННОВАЦИОННАЯ РЕЦЕПТУРА АКРИЛОВОЙ ГРУНТОВКИ:

— вода очищенная – 45,6%;

— связующее тонкодисперсионное – 50,1%;

— фунгицид (или медный купорос) – 1,1%;

— поверхностно-активные соединения – 0,4%;

— коалесцент (если нужно) – 2,5%;

— пеногаситель (если есть необходимость) – 0,3%.

Конечно, этот вариант стоит больше, чем классический состав, но по эффективности будет превосходить большинство заводских дорогостоящих вариантов.

2. ПВА-грунтовка своими руками

Если понадобится глубоко проникающая грунтовка за небольшую цену, то её вполне можно изготовить из клея ПВА. Но клей необходимо использовать только из ПВА-строительный, а не канцелярский вариант. Независимо от этого, грунтовка будет стоить во много раз дешевле, чем самая дешёвая покупная (готовая).

Для основания пола, грунтовка с самодельным составом (основанном на ПВА) может создать качественный гидрофобный слой защиты, улучшенную адгезию материалов. Она имеет возможность проникать в глубину структуры материала.

Цена грунтовки напрямую зависит от глубины проникновения в бетонную (деревянную) структуру – чем глубже, тем дороже! Учитывая этот аспект, можно сильно сэкономить, но в качестве придётся незначительно уступить.

Вариант с ПВА-смесью является наиболее бюджетным, в принципе вполне подходит для домашнего строительства (ванная, гараж, кухня).

Инструкция действий

Прежде всего, для приготовления грунтовой смеси, понадобятся: строительный ПВА, перфоратор с миксером и большая ёмкость из пластика. Все работы должны производиться в тёплом помещении.

Наносить грунтовочную смесь рекомендуется использовать плоские кисти, валик с коротким ворсом и пластиковый контейнер, имеющий ребристые края.

Рекомендация! Не делайте сразу большое количество смеси – можно оставить неиспользованной часть приготовленного объёма, и материал пропадёт (затвердеет)!

Для приготовления смеси, нужно налить клей ПВА в пластиковое ведро и маленькими порциями добавлять в него тёплую воду, осуществляя при этом непрерывное перемешивание до получения однородной (сметанообразной) массы.

Компоненты следует брать в таком соотношении: 1 часть воды на 2 части клея. Можно увеличить прочностные характеристики путём добавления смеси просеянного мелкого мела или гипса.

Когда обработке подлежит бетонный пол, в раствор нужно включить цементную «муку» марки не меньше М400.

Заключительные рекомендации

Следует предостеречь от вероятных неприятностей, с которыми может столкнуться мастер при применении состава:

1. Нельзя наливать слишком толстый слой грунтовки, иначе со временем он может отойти от основания вместе с готовым финишным покрытием.

2. Когда планируется красить пол в светлые тона, нужно максимально истончить слой грунтовки. Через полгода тёмный цвет бетона обязательно проявится в виде тёмных разводов и жёлтых пятен.

Используя материалы статьи, можно нехитрым способом осуществить качественный и недорогой монтаж грунтовки под линолеум, плитку, ламинат, краску или любое другое напольное покрытие.

Хотя, в случаях, когда используются собственноручные смеси, качество материала и итог работы, конечно же, снижаются, чем при аналогичном использовании заводского варианта строительной грунтовки.

        Поделиться:

Кварцевая грунтовка — состав, свойства и сфера применения. — Farbe

Чтобы поверхность не тускнела и не растрескивалась, ее необходимо обрабатывать специальными средствами. Самым эффективным средством служит кварцевая грунтовка.

Этот уникальный материал хорош тем, что упрочняет свойства поверхности, а также разглаживает ее. После чего на грунтовку можно наносить различные краски, либо штукатурки.

В состав кварцевой грунтовки входят сухие строительные компоненты. Ключевым наполнителем здесь являются органические материалы с включением химического зерна, а также кварцевой крошки. Данные компоненты отвечают за прочность и позволят поверхности сохранить свои технологические и конструктивные особенности на долгие годы.

К плюсам использования кварцевой грунтовки относится то, что при взаимодействии кварцевого зерна с поверхностью уменьшается время высыхания материала. Также кварцевое зерно очень устойчиво к атмосферному давлению. Таким образом, такие интересные свойства материала увеличивают спрос на него. Кварцевую грунтовку можно применять не только для дальнейшего обрабатывания стен, полов и других поверхностей, но и для придания им прочности и твердости.

Из вышеизложенного следует, что данный материал подходит для обработки как бетонных поверхностей, так и металлических.

Для того чтобы взаимодействие с поверхностью было наиболее эффективным, ее требуется обезжирить. Ведь излишняя влажность, наличие пыли, жир нарушают конструктивные свойства кварцевой грунтовки.

К общим свойствам и достоинствам этого материала можно отнести следующие:
  • Сильную влагостойкость (при условии обезжиривания поверхности).
  • Достаточную механическую стойкость при трении с другими материалами и долгий срок службы.
  • Хорошие свойства сцепления с основой.
  • Создание необходимой шероховатой поверхности.
  • Наличие возможности наносить различные виды штукатурки на материал.

Для сохранения свойств грунтовки, нужно соблюдать условия хранения данного материала.

Очень важно обеспечить качественную подготовку поверхности. Она заключается в очищении поверхности от различных включений, краски, камней, пыли. Бывает так, что поверхность содержит как впадины, так и выпуклые неровности. Все это тщательно необходимо выровнять. После уже можно переходить к процессу подготовки рабочей смеси. Во всех магазинах данный материал обычно поставляется в готовом виде, но за счет химических свойств вещества в грунтовке абсорбируются и их необходимо друг с другом смешивать. Существует смесь и в сухом виде, но она, как правило, менее качественная и более затратная по времени приготовления и вспомогательным компонентам.

В зависимости от обрабатываемой поверхности (бетон, металл, дерево) меняется расход грунтовочного материала. Это обусловлено наличием пористости материалов: металл, к примеру, фактически ей не обладает. Сама смесь готовой грунтовки имеет однородную консистенцию, без комочков, легко наносится при помощи кисти или специального валика. Преимуществом является то, что высыхает грунтовая смесь приблизительно за три часа.

Приобрести этот вид грунтовки можно на нашем сайте в разделе «Грунтовки». Кварцевые грунтовки выпускают разнообразных оттенков. Одни из них белые и предназначены для отделки штукатуркой и дальнейшего окрашивания. Также выпускают грунтовки цветные, которые служат для отделки наружной части здания. Через них, как правило, основание стен не просвечивается и дальнейшее окрашивание не требуется.

Итак, кварцевые грунтовки идеально подойдут для работы на любых поверхностях и позволяют проникать на любую глубину. Этот материал удобен в обработке бетонных, кирпичных, стеклянных и других строительных поверхностей. А также кварцевые грунтовки обеспечивают не только контактные свойства материалов, но и их защиту.

Задать вопрос эксперту

Виды грунтовки, характеристики, применение, преимущества

Содержание статьи

Нужна ли грунтовка?

Тем, кто берется за самостоятельный ремонт своего жилья, важно помнить, что без нее качественная покраска невозможна, как и укладка кафеля, штукатурка, наклеивание обоев. Для приверженцев идеи ремонта в доме своими руками предлагаем небольшой очерк-систематизацию о применении и подборе данного продукта, ее месте в процессе ремонта своей квартиры.

Отличие нее от краски заключается в меньшем количестве пигментов и наличии такого компонента, как базы. Грунтовка – это состав, нанесение которого на предваряет ее покраску, чтобы усилить сцепление краски с плоскостью и улучшить впитывание краски.

Для большего качества работ лучше выбрать продукт для профессионального применения.

Храктеристики грунтовки

Преимущества грунтовки
  1. Снижает расход краски
  2. Обеспечивает качественное наложение ЛКМ и прочность ее прикрепления к поверхности
  3. Обеспечивает равномерность окраски
  4. Почти полностью исключает трещины на краске
  5. Исключает процесс отхода наклеенных обоев от стены
  6. Исключает возможность непрочного крепления кафельной плитки
  7. Обеспечивает гладкость окрашенной поверхности.
  8. Исключает проявление пятен после покраски
  9. Обеспечивает блеск глянца
  10. Избавляет от химического запаха во время покраски
  11. Позволяет перекрасить из темного цвета в светлый
  12. Модифицирует ржавчину в защитный слой.
  13. Предотвращает заплесневение и гнилостные процессы
  14. Создает водоотталкивающую пленку на предмете
Поверхности для грунтовки:
  1. Кирпич
  2. Бетон монолит
  3. Цемент
  4. Блок пенобетонный
  5. Стяжка ангидридная
  6. Штукатурка
  7. ДВП, ДСП
  8. Гипсокартон листовой
После грунтовки проводят следующие работы:
  1. Шпаклевание
  2. Оштукатуривание
  3. Окрашивание
  4. Покрытие гидроизоляционными смесями
  5. Нанесение напольных смесей
  6. Наклейка обоев
  7. Крепление облицовочной плитки.
Поверхности, которые подлежат грунтовке:
  1. Пол
  2. Стены
  3. Потолок
  4. Металлоконструкции
Состав грунтовки включает различного происхождения и агрегатного состояния пленкообразующие вещества:
  1. Олифа
  2. Смолы эпоксидные, алкидные и мочевино-формальдегидные
  3. Пигменты (сурик, крон цинковый)
  4. Наполнители (тальк, слюда, мел)
  5. Связывающие вещества
Таблица 1. Варианты составов
Наименование
компонентов
Содержание компонентов в составе, мас.%
1 2 3 4 5 6 7 8
Бутадиен-стирольный каучук 8,0 3,5 12,5 8,0 8,0 8,0 8,0
П-трет-Бутилфенолформальдегидная смола 7,5 7,5 7,5 4,5 10,5 7,5 7,5
Сополимер этилена с винилацетатом марки «Эватан» 6,5 6,5 6,5 6,5 6,5 2,5 9,0
Смесь аминометильныхпроизводных нонилфенолов и иххлоргидратов 1,0 1,0 0,5 1,0 0,5 0,5 0,3
в соотношении: (амин:хлоргидрат) (2:1) (2:1) (2:1) (2:1) (2:1) (2:1) (2:1)
Пирокатехин 0,1 0,1 0,1 0,1 0,6 0,1 0,1
Оксид магния 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
Технический углерод 1,5 1,5 2,0 1,5 1,0 1,5 1,5
Сольвент нефтяной 74,9 79,4 70,4 77,9 72,4 79,4 73,1
Таблица 2. Варианты составов
Наименование
компонентов
Содержание компонентов в составе, мас.%
1 2 3 4 5 6 7 8
Бутадиен-стирольный каучук 8,0 8,0 8,0 8,0 8,0 8,0 8,0
П-трет-Бутилфенолформальдегидная смола 7,5 7,5 7,5 7,5 7,5 7,5 7,5
Сополимер этилена с винилацетатом марки «Эватан» 6,5 6,5 6,5 6,5 6,5 6,5 6,5
Смесь аминометильных производных нонилфенолов и их хлоргидратов 0,5 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 0,2
в соотношении:
(амин:хлоргидрат) (25:1) (10:1) (5:1) (3:1) (1,5:1) (1:1) (2:1)
Пирокатехин 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
Оксид магния 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
Технический углерод 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5
Сольвент нефтяной 75,4 74,9 74,8 74,9 74,9 74,8 75,7

Таблица 3. Варианты составов
Наименование компонентов Содержание компонентов в составе, мас.%
1 2 3 4 5 6 7 8
Бутадиен-стирольный каучук 8,0 8,0 8,0 8,0 8,0 8,0 8,0
П-трет-Бутилфенолформальдегидная смола 7,5 7,5 7,5 7,5 7,5 7,5 7,5
Сополимер этилена с винилацетатом марки «Эватан» 6,5 6,5 6,5 6,5 6,5 6,5 6,5
Смесь аминометильных производных нонилфенолов и их хлоргидратов 0,3 3,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0
в соотношении:
(амин:хлоргидрат) (2:1) (2:1) (2:1) (2:1) (2:1) (2:1) (2:1)
Пирокатехин 0,1 0,1 0,02 0,7 0,9 0,1 0,1
Оксид магния 0,5 0,5 0,5 1,0 0,1 0,5 0,5
Технический углерод 1,5 1,5 1,48 1,3 1,5 0,5 3,5
Сольвент нефтяной 75,6 72,9 75,0 74,0 74,5 75,9 76,9
Виды грунта:
  1. Латексный
  2. Бетоноконтакт – адгезионный с акриловым связующим. Улучшает прикрепление декоративного покрытия к гладким невпитывающим материалам как бетон, плитка кафельная. Содержит кварцевый песок, цемент
  3. Проникающая – ее мельчайшие частицы глубоко заполняют поры. Имеет цвет мутной жидкости.
  4. Укрепляющая. Связывает с предметом, уравнивает его. Белого цвета, потому что частицы ее крупные. Впитывается неглубоко.
  5. Праймер:
    • мастика битумная, обезжиривает бетон и железо. Непрозрачная белая жидкость глубочайшего проникновение, образует водонепроницаемую пленку, уничтожает ржавчину.
    • Эпоксидный праймер для обработки железа и защиты от ржавчины
    • Полиуретановый праймер для укрепления пористого бетона, металла, кирпича, штукатурки, когда планируется покрытие из полиуретана, полимерцемента, эпоксида. Действует на холоде, уничтожает ржавчину.
  1. На алкидной смоле. Для обработки дерева, ПВХ, стекла, стекловолокна, кафеля. Растворитель к ней – уайт-спирит. Подходит под все виды красок, шпаклевок, большинство клеев. Цена низкая.

Бывает следующих видов:

        • влагоизоляционная,
        • противогрибковая,
        • противоплесневая,
        • пигментированная,
        • антикоррозийная.

Недостатки: сохнет более половины суток; если наносить краску на непросохшую грунтовку, краска свернется. Уайт-спирит повышает токсичность ее. Нужна вентиляция помещения, пока не высохнет полностью. Не берет рыхлую и осыпающуюся основу. Инструменты после работы с ней не отмываются. Их можно хранить некоторое время, обернув тканью, смоченной уайт-спиритом, и надев сверху полиэтиленовый пакет. Через два дня после такого хранения использованные кисти и валики засыхают и выбрасываются. Деформирует строительные синтетические сетки. Токсична, востребованы средства защиты как очки, перчатки, маска.

  1. На акриловой основе, полимерный состав. Полупрозорачный раствор, создает бесцветную пленку. Застывая, создает дышащую кристаллическую решетку. Имеет антисептическое и антигрибковое действие. Почти нетоксична.

Виды грунтовок

Глубоко проникающая грунтовка (до 20 мм)
.

Укрепляет обрабатываемую плоскость. Цена невысокая. Недостатки: на нее ЛКМ наносится недостаточно равномерно: чередуются блестящие и шероховатые участки. Если на стене имелись пятна, они проявятся после покраски.

Грунтовка густая латексная акриловая.

Выравнивает изделие, не дает проявляться пятнам. Недостатки: меньшая проникающая способность, высокая цена. Можно наложить вторым слоем после жидкого грунта глубокого проникновения, особенно при фасадных работах.

Универсальная грунтовка.

Проникновение до 5 мм. Действует на улице и в помещении, на любых предметах. Действует при повышенной влажности и перепадах температур. Используется под шпаклевку и гипсокартон. Универсальная включает в себя такие виды.

Полиуретановая.

Для бетона и под покрытия из полиуретана. Проникает вглубь него до 3 мм, что помогает, например, при накладывании пола из полиуретана или эпоксида. Также пригоден для дерева, железа. Другая разновидность впитывается до 10 мм глубины и повышает его износостойкость.

Шеллаковая.

Основа – млечный сок насекомых, разбавленный метиловым спиртом. Мешает проступанию смолы на древесине. Является базой для водных морилок.

Алюминиевая.

Антикоррозийная, придает глянец предмету. Защищает черные металлы. Выпускается как аэрозоль, используется в промышленности и сельском хозяйстве.

Поливинилацетатная.

Свойства, как у латексной, помимо этого, герметизирует. Густая, белого цвета. Наносится под светлые ЛКМ, не имеет запаха, лучше всего работает на бетоне, штукатурке, шпаклевке и гипсокартоне.

Эпоксидная.

Для бетона и железобетона, камня, дерева, металла. Характеристики подобны полиуретановой.

Силикатная.

Для фасадных работ, основа — калийное жидкое стекло. Используется под силикаты, бетон, штукатурку известковую. Можно обрабатывать любые, в том числе влажные и подземные помещения.

Функции грунтовки:

  1. Уничтожение ржавчины
  2. Подготовка деревянной изделий к окрашиванию
  3. Устранение дефектов
  4. Обеспечение сцепления с ЛКМ

Грунтовка применение

Как правильно выбрать грунтовку

Выбор зависит от материала на котором будет применяться. При хорошем состоянии — берем укрепляющую основу, которая обеспылит ее и покроет защитной пленкой.

Если плоскость нуждается в глубоком связывании, требуется продукт глубокого проникновения с мельчайшими частицами.

Также учитываем особенности применяемой отделки. Под вододисперсионную ЛКМ применяется водорастворимый грунт, под масляную применяется масляная.

Акриловая применяется везде, кроме металла. На него идут различные специализированные грунтовки.

Пассивирующая нейтрализует действие воды.

Протекторный — нейтрализует действие электролита.

Для ржавых поверхностей можно взять преобразователь ржавчины

Инструмент для грунтовки:
  1. Кисти, валики
  2. Распылитель
  3. Наждак мелкий, машина шлифовальная
  4. Скребок, шпатель
  5. Шпаклевка
  6. Смывка
  7. Ванночка для состава
  8. Средства защиты: очки, перчатки

Расход идет из расчета примерно 150 мл на 1 метр квадратный поверхности.

Правила нанесения грунтовки:
  1. Очистка основы от всех посторонних элементов механическим воздействием или смывкой. Неровности до 1,5 выравнивать шпатлевкой и сушить до 1 недели.
  2. При желании шлифовка шлифовальной машиной или наждаком.
  3. Наложение грунта.
    • налить ее в посуду, окунуть в нее кисть или валик
    • нанести ее на основу, углы и за батареями
    • Дождаться полного высыхания слоя. Неблагоприятны низкая температура и высокая влажность. Оптимальна температура около 20 градусов С.
    • после высыхания второго слоя надо сразу применить ЛКМ
    • рыхлое основание, как, например, пенобетон нуждается в большем количестве продукта.

Меры безопосности при нанесении грунтовки:

  1. Защищать глаза и руки очками и перчатками
  2. Помнить о возможности аллергической реакции
  3. Избегать попадания ее на тело, т.к. она плохо смывается.

Взаимодействие с разными поверхностями:

  1. Бетон. Лучше всего употреблять проникающую, особенно перед нанесением самовыравнивающей смеси для пола.
  2. Дерево, гипс. Защита от воды.
  3. Гладкие поверхности. От гладкой легко отпадают отделочные материалы. Требуется специальная грунтовка с кварцевым песком для удержания отделки.
  4. Защита от бактерий и плесени. Требуется с антигрибковыми и антибактериальными добавками. При появлении плесени хотя бы на одном участке надо обработать все стены с целью защиты.

Особенности работы с различными видами грунтовок

  1. Кварцевая. Наносится на гипсокартонные стены, поверх первого слоя наносится слой шпаклевки, затем на шпаклевку кладется второй слой, а затем применяется ЛКМ. Цвет ее должен соответствовать цвету краски.
  2. Бетоноконтакт. Для плотных невпитывающих изделий, как блоки, стены, потолки, монолит. Перед оштукатуриванием необходимо обработать их бетоноконтактом.
  3. Ее не могут заменить дисперсии из полимера или водоэмульсионные краски, при их употреблении неизбежен бракованный результат.

Производители лучших грунтовок:

      • Тиккурила, Финляндия
      • Sherwin-Williams, USA
      • Финнколор, Россия
      • Beckers, Швеция
      • Хенкель Баутехник (Ceresit СТ 17)
      • Dali грунт-эмаль по ржавчине
      • Olympic (Acryl Grundierung)
      • Беларусь (Belinka)

Лучше брать грунтовки и сухие смеси от одного производителя, они лучше сочетаются.

Фасовка грунтовки

Готовые смеси, неразбавленные концентраты и сухие смеси, иногда баллоны.

Это наиболее необходимые знания о ней для людей, любящих ремонт. Успеха Вам, работы без выбраковки, правильного Вам подбора сочетаний отделочных изделий!

Грунтовка глубокого проникновения

Использование грунтовки – важный и обязательный этап проведения работ. Продуктом производят начальную обработку основания перед нанесением любых последующих отделочных материалов. Качественная грунтовка укрепляет основание, связывает пыль на его поверхности и уменьшает впитывающую способность. В результате шпатлевка или любой другой отделочный материал наносится равномерно, быстро и легко, а риск появления дефектов минимизируется.

Описание и сфера применения грунтовки глубокого проникновения

Одной из разновидностей грунтовок является грунтовка глубокого проникновения. Этот состав был разработан специально для самых сложных и проблемных оснований: старых, рыхлых и пористых стен. Грунтовка глубокого проникновения представляет собой жидкость, изготовленную на основе различных акриловых полимеров. Учитывая инновационный состав и особо малый размер частиц, она способна проникать глубоко в основание и «склеивать» его. Только на скрепленное таким образом основание можно будет без опасения клеить плитку, наносить шпатлевку, клеить обои. В частности, именно глубоко проникающей грунтовкой нужно проводить обработку кирпичной стены перед нанесением краски. Укрепленные грунтом, швы не начнут крошиться со временем. Или обработку стены, которую решено побелить известью. Акриловые смолы свяжут побелку со стеной, и она не будет отслаиваться от стены. Продукт эффективно укрепляет поверхности из газобетонных и пенобетонных блоков, кирпича, гипсокартона, штукатурок различного состава и многих других поверхностей. Глубоко проникающая грунтовка используется для внутренних и наружных работ.

Совет профессионала: Не наносите грунтовку глубокого проникновения на гладкие поверхности, которые плохо впитывают воду – плитку, керамогранит, гладкие бетонные плиты перекрытия, а также на металлические основания или стены с жирными или битумными пятнами.

Технические характеристики грунтовки

Технические характеристики каждой конкретной грунтовки глубокого проникновения очень сильно зависят от производителя и, как следствие, ее химического состава.
Ориентировочное содержание нелетучих веществ обычно 12-20 % от общей массы жидкости.
Время высыхания нанесенного состава – 1-3 часа при нормальных погодных условиях, но может увеличиться и до 24 часов.
Благодаря введенным в состав продукта фунгицидным добавкам сдерживает появление плесени и различных грибков.
Способна выдержать до 5 циклов замораживания и оттаивания. Причем некоторые продукты способны выдержать температуру до -15°С без потери качества.
«Склеивает» рыхлое основание, но при этом не нарушает нормальных воздухообмен в помещении.
Способна снизить расход штукатурки, шпатлевки, обойного клея за счет более легкого и равномерного нанесения на основание.
Когда грунт высыхает, она образует на поверхности прозрачное покрытие.
Делает основание более стойким к механическим или даже химическим воздействиям.
Гарантирует отличное сцепление наносимого отделочного материала с поверхностью.

Технология нанесения и расход проникающей грунтовки

Технология нанесения грунтовки глубокого проникновения довольно проста.

Для начала со стены удаляются отваливающееся и осыпающееся старое покрытие. Грунтовка глубокого проникновения способна скрепить рыхлое основание, но никак не приклеить уже отслоившийся кусок штукатурки. Пыль нужно удалить метелкой или пылесосом.
Если грунтовка является концентратом, то он разбавляется чистой водой так, как это рекомендовано производителем на упаковке. Расход продукта на 1 м² находится зависит от степени концентрации и впитывающей способности основания и варьируется в пределах 80-200 мл.
Наносят грунт кисть, валиком и пульверизатором. Если основание очень пористое, то лучше нанести ее в два слоя. Не забывайте следить, чтобы температура воздуха во время нанесения грунта была в пределах +5 до + 30 ºС и поддерживалась нормальная влажность воздуха.

Совет профессионала:Очень удобный инструмент для распыления грунта вы можете сделать сами. Для этого распылитель с бутылки очистителя стекол переставьте на обычную на бутылку 1,5 л от напитка или минералки (резьбы на крышках совместимы).

Чем отмыть грунтовку

Что делать, если грунтовка глубокого проникновения случайно попала на некоторые поверхности, грунтовать которые мы не собирались? Поскольку покрытие имеет сложный химический состав, то удалить его может быть довольно трудно. Но на строительных форумах специалисты приводят несколько действенных способов:

С пластиковых поверхностей грунтовка удаляется содой и водой.
С керамической плитки отмыть следы помогает кислотное моющее средство «Силит».
Пятна грунтовки способна размягчить концентрированнаяуксуснаяэссенция. Под воздействием уксуса акриловые полимеры размягчаются и удаляются жесткой щеткой.

Как выбрать грунтовку

Чтобы выбрать правильный продукт и избежать ненужных разочарований, следует учесть несколько простых правил по выбору:

Не стоит покупать продукт неизвестного производителя. Ищите продукт известного производителя с хорошей репутацией
Ищите продукт исключительно в оригинальной таре производителя
В идеале старайтесь приобретать грунтовку глубокого проникновения и остальные отделочные материалы у одного и того же производителя. Такие продуктыбудут иметь «родной» состав и хорошо дополнять друг друга.
Наконец, выбирайте грунтовкуглубокого проникновения в зависимости от того, «на что» и «под что» она будет наноситься. То есть нужно четко знать, на какую поверхность будет наноситься грунт и какой отделочный материал будет нанесен на загрунтованную поверхность впоследствии.

Грунтовка АК–070, Грунтовка АК–070М для грунтования деталей из алюминиевых, магниевых, титановых сплавов и углеродистой стали

Грунтовка АК–070

Купить Грунтовку АК–070

Грунтовка АК–070 выпускается по ГОСТ  25718-83

Назначение грунтовки АК–070

Для грунтования деталей из алюминиевых, магниевых, титановых сплавов и стали углеродистой, оцинкованной и нержавеющей. Также допускается нанесение грунтовки по черным металлам, коррозийно-стойкой, кадмированной и  оцинкованной стали, медным сплавам. Грунтовку используют под различные эмали, в том числе – АС, МС, ЭП, ГФ, ХВ, АК, ПФ, НЦ, ХС, МЛ; шпатлёвку ПФ-002. С эмалью ХВ-124 грунтовку допускается использовать для окраски пластмасс (винипласта). Допускается применение грунтовки и для других целей.

Состав грунтовки АК–070

Грунтовка представляет собой суспензию пигментов в растворах акриловых смол и смеси органических растворителей с введением добавок и пластификаторов.

Свойства грунтовки АК–070

Грунтовка АК-070 относится к грунтовкам со спецсвойствами, а именно химически стойким. Грунтовка АК-070 обладает высокими адгезионными свойствами. Покрытие в тонком слое обеспечивает высокую атмосферостойкость, термостойкость и механическую прочность плёнки.  Системы покрытий с грунтовкой АК-070  могут эксплуатироваться на открытом воздухе в различных климатических зонах и внутри помещений. Они стойкие к пресной воде и ее парам; морской воде; минеральным маслам и смазкам; бензину, керосину и другим нефтепродуктам; при воздействии агрессивных газов; растворам кислот и солей; растворам щелочей и основных солей; растворам нейтральных солей; при воздействии электрического тока. Покрытия с грунтовкой АК-070 эксплуатируются в зонах с умеренным,  холодным, сухим и влажным тропическим климатом.

Грунтовка АК-070 с нормами массовой доли нелетучих веществ (33 – 39)% и условной вязкости (60 – 130)с, имеет обозначение АК-070 М.

Технические характеристики грунтовки АК–070
 
Внешний вид покрытия Серый. Оттенок не нормируется.
Цвет плёнки Желтый, оттенок не нормируется.
Условная вязкость по вискозиметру ВЗ-246 с диаметром сопла 4 мм при температуре (20,0 ± 0,5) °C 13–20
Массовая доля нелетучих веществ,% 13,5–16,0
Время высыхания до степени 3 при температуре (20+2) °C, ч, не более 0,5
Твердость пленки, по маятниковому прибору ТМЛ (маятник А), отн. ед., не менее 0,4
Прочность пленки при ударе по прибору У-1, см, не менее 50
Адгезия, баллы, не более 1

Цветовые решения грунтовки АК–070

После высыхания грунтовка образует поверхность жёлтого цвета.

Хранение грунтовки АК–070

Гарантийный срок хранения — 6 месяцев со дня изготовления.

Грунтовку АК-070 хранят при температуре не выше +30оС.

Срок службы грунтовки АК–070

При соблюдении требований к подготовке поверхности, нанесению материалов, их сушке возможна эксплуатация покрытий с грунтовкой АК-070 с сохранением их защитных и декоративных свойств (в зависимости от финишной эмали)

— не менее 5 лет в умеренном климате;

— не менее 4 лет в холодном климате;

— не менее 2 лет в сухом и влажном тропическом климате.

Фасовка

Фасовка грунтовки АК-070 производится в специальную промышленную тару с учетом всех требований потребителя.

Категории

АК-070, АК-070 М, грунтовка, алюминий, магний, титан, сталь, оцинковка, химстойкая, атмосферостойкая, термостойкая, антикоррозионная, быстросохнущая, акриловая

Применение грунтовки АК–070

Грунтовка АК-070 наносится на металлические поверхности. Перед нанесением грунтовки следует провести подготовку окрашиваемой поверхности. Все рабочие поверхности должны быть чистыми и сухими. Грунтовка АК-070 имеет невысокую вязкостью и может использоваться без  разбавления. Но при необходимости её разбавляют растворителями 648 или Р-5А, грунтовку АК-070М нужно разбавлять обязательно. Грунтовку АК-070 наносят методом распыления или кистью. На окрашиваемую поверхность грунтовку наносят при температуре окружающего воздуха от +5 до +30оС и относительной влажности не более 85%. Расход грунтовки АК-070 на однослойное покрытие 115–150г/м².

Меры предосторожности

При проведении окрасочных работ с грунтовкой АК-070, а также после их окончания необходимо тщательно проветрить помещение. Для защиты рук применять резиновые перчатки. Беречь от огня!

Основные преимущества грунтовки АК–070

—  Грунтовка АК-070 универсальная, может наноситься практически на все металлические поверхности;

—  Грунтовка АК-070 химически стойкая, обладает высокими адгезионными свойствами;

— Грунтовка АК-070 совмещается со многими специальными, защитными, декоративными и отделочными лакокрасочными материалами;

— Грунтовка АК-070 образует покрытие, обладающее высокой атмосферостойкостью, термостойкостью, эластичностью и механической прочностью.

— Системы покрытий с грунтовкой АК-070 эксплуатируются во всех климатических зонах.

Bullet Primer Composition; Смеси, ударные шапки, Berdan VS Boxer Reloading и многое другое

Боеприпасы

Centerfire используют капсюли в качестве основного воспламенителя для выстрела патрона. Капсюль состоит из чашки, заполненной взрывчатым веществом, чувствительным к первичному удару. В капсюлях «Бердан» имеется наковальня в гильзе и два отверстия или форточки для доступа горящей первичной смеси к пороховому заряду. В боеприпасах Boxer с капсюлем имеется одно вентиляционное отверстие, а наковальня встроена в капсюль.Ударник попадает в капсюль и вмятины в чашке. Грунтовочная смесь раздавливается между деформированной чашей и наковальней и воспламеняется, продувая вентиляционные отверстия, воспламеняет порох.

Перезарядка грунтовки Berdan и Boxer

Хирам Бердан был американским изобретателем и разработал грунтовку Berdan. Изобретение Бердана чрезвычайно популярно в европейских боеприпасах, в частности, в боеприпасах для военных. С двумя дефлекторами гильзы Бердана заряжать сложно, возможно, но сложно.Эдвард Мунье Боксер или Королевский арсенал в Вулидже, Англия, изобрел первичный боксер, используемый в американских боеприпасах, поскольку он облегчает перезарядку. Он распространен как в спортивных, так и в военных боеприпасах США. Таким образом, мы имеем следующее:
Тип Диаметр
дюймов Примечания
Маленький пистолет 0,175 38/357 Magnum, 9 мм
Большой пистолет 0,210 45 Colt, 45 ACP, 44 Magnum
Маленькая винтовка 0,175 223 Remington / 5,56 NATO
Large Rifle 0,210 308 Winchester /7.62 NATO
5O BMG 0.315 .50 Калибр 12,7 x 99 мм Пулемет Браунинг
Дробовик 0.209 12, 20 и 410 ружье

Идентификаторы праймеров

Различные производители грунтовок обозначают свою продукцию цифрами, например буквенно-цифровыми идентификаторами. CCI, как правило, использует три цифры, в то время как многие используют целые числа и дроби, такие как Ремингтон. Winchester использует буквенные символы для металлических боеприпасов и буквенно-цифровые символы для капсюлей для дробовика или систему счисления в прошлом. Стандартизации нет.

Состав грунтовочной смеси

Праймеры

заполнены чувствительными к ударам смесями взрывчатых веществ, хотя и в небольших количествах.Ранние грунтовки использовали в качестве смеси гремучую ртуть. Большинство ранних капсюлей вызывали коррозию стволов и требовали очистки огнестрельного оружия вскоре после использования, так как остатки гигроскопичны или притягивают воду. Некоррозионные капсюли появились в 1920-х годах для спортивных боеприпасов, но большинство вооруженных сил использовали коррозионную грунтовку, и многие европейские военные боеприпасы до сих пор используют. Стифнат свинца с нитратом бария. Появляются бессвинцовые капсюли, но военные испытания показывают, что страдает точность, и коррозионные капсюли используются для военных, потому что они более надежны и лучше хранятся, по крайней мере, при военных нагрузках в Восточной и Европе.Единственное место, где этилированные грунтовки могут быть фактором здоровья, — это домашние плиты. Большинство бессвинцовых грунтовок производятся в России и Южной Корее. Поскольку точность и надежность являются первостепенным критерием при выборе боеприпасов, бессвинцовые капсюли не пользуются популярностью. Но, как говорится, солдат-химик пытается найти надежное бессвинцовое решение. Большинство сознательных стрелков в любом случае склонны чистить свое оружие вскоре после использования. В современных боеприпасах Boxer используются не вызывающие коррозию и не содержащие ртути капсюли. Капсюли Magnum просто предлагают более горячие смеси для воспламенения сжатых зарядов трудновоспламеняющихся бездымных порохов в патронах Magnum.

Капсюли и праймеры

Капсюль, являющийся фактором воспламенения в боеприпасах, является важным элементом. Капсюли и праймеры являются стандартом, хотя были попытки использовать праймеры с электрическим инициированием, но они не получили широкого распространения. Более быстрое время фиксации электрических капсюлей было бы полезно для соревнований по спортивной стрельбе, но есть дополнительные расходы, связанные с включением источника электрического тока. Батареи или пьезоэлектрические источники сами по себе проблематичны.

границ | Микробиомы растений: влияют ли различные подходы к сохранению и наборы праймеров на нашу способность оценивать микробное разнообразие и состав сообщества?

Введение

Микробные сообщества, связанные с различными компартментами растений, от корней до листьев (микробиом растения), играют решающую роль в здоровье и продуктивности растений (Köberl et al., 2013; Andreote et al., 2014; Berg et al. al., 2016; Rosier et al., 2016; Colla et al., 2017; Qiu et al., 2019). Микробиом растений может выполнять ключевые функции, обеспечивая питательными веществами и помогая контролировать патогены (Schmalenberger et al., 2008; Compant et al., 2010; Suárez-Moreno et al., 2012; Sessitsch and Mitter, 2015). Из-за этого использование полезных микробов, связанных с растениями, считается многообещающим новым инструментом повышения продуктивности и устойчивости сельского хозяйства. Понимание механизмов сборки микробиома растений и того, как эти микробиомы взаимодействуют со своими хозяевами, является фундаментальным первым шагом к достижению этой цели.За последние несколько лет растет число исследований с использованием секвенирования следующего поколения для раскрытия структуры и динамики микробиома растений (Berg et al., 2014; Agler et al., 2016; Hamonts et al., 2018). В частности, секвенирование ампликонов широко используется для обнаружения фундаментального процесса микробной сборки при прорастании, росте, метаболизме и защите растений (Mayak et al., 2004; Weyens et al., 2009; Schmidt et al., 2014).

Несмотря на важность и потенциальные возможности, предлагаемые растительным микробиомом, все еще существует множество проблем, которые необходимо решить для расширения наших знаний, включая отсутствие крупномасштабных исследований для определения процессов, которые управляют сборкой и функцией растительных микробиомов.Крупномасштабные исследования микробиомов растений сдерживаются проблемами логистики, включая сохранение растений после сбора образцов, а также его важную роль в сохранении первоначального микробного сообщества в неприкосновенности. Например, метод консервирования методом мгновенного замораживания (в жидком азоте) для отбора проб и транспортировки в лабораторию считается золотым стандартом для полевых исследований, поскольку пробы сразу же помещаются при -20 ° C или ниже после сбора на месте , чтобы минимизировать нарушения работы растительной ткани и ее микробиома (Agler et al., 2016; Тимм и др., 2016; Hamonts et al., 2018). Однако в некоторых случаях мгновенное замораживание нецелесообразно из-за логистических и финансовых трудностей, особенно когда требуется большое количество образцов из отдаленных районов или в глобальных и региональных исследованиях. Это привело к разработке альтернативных подходов к хранению образцов, которые также доказали свою эффективность на нерастительных образцах, включая использование карт FTA (Song et al., 2016), этанола (Estes et al., 2013; Koch et al. др., 2013), CTAB (Hammer et al., 2015) и RNAlater (Campbell et al., 2004; Sanders et al., 2014). Однако большинство из этих методов неприменимы для микробиома растений из-за требования целостности ткани для последующего анализа. В исследованиях микробиома растений мгновенное замораживание по-прежнему является наиболее распространенным методом сохранения растительного сырья (Agler et al., 2016; Deyett and Rolshausen, 2020), но в неоптимальных условиях сушку на воздухе с силикагелем (Bazzicalupo et al., 2013). ) инкубация на льду или замораживание (от -4 ° C до 4 ° C, Kaushal et al., 2020) также использовались для сохранения образцов, но влияние этого подхода на целостность микробиома не было полностью протестировано по сравнению с методом мгновенного замораживания. В связи с растущим интересом использования микробиома растений для устойчивого повышения урожайности сельскохозяйственных культур в последнее время было запущено больше инициатив и проектов, направленных на расширение микробиома растений от регионального до глобального масштаба. Поэтому поиск практичных и экономически эффективных подходов к консервации имеет решающее значение для размещения постоянно растущего числа образцов для секвенирования и, в конечном итоге, использования микробиологических знаний для разработки устойчивых сельскохозяйственных технологий.

Другая серьезная проблема связана с тем фактом, что бактериальные микробиомы растений часто оцениваются с использованием других наборов праймеров (например, 799F-1193R), чем те, которые используются для почв (например, 341F-805R, 515F-806R). Это не проблема для грибов, поскольку исследования растений и почвы могут определять последовательность одного и того же ITS-региона грибов без больших различий. В случае бактерий в исследованиях микробиома растений часто используются праймеры гена 16S рРНК (799F-1193R), нацеленные на область V5 – V7 гена (Bai et al., 2015; Liu et al., 2017). В отличие от наборов праймеров, наиболее часто используемых для почв (например, 341F-805R; регион V3 – V4, Delgado-Baquerizo et al., 2016; Feng et al., 2016; 515F-806R; регион V4, Caporaso et al., 2011; Caporaso et al., 2012; Walters et al., 2016), эти наборы праймеров для микробиома растений минимизируют секвенирование хлоропластов и митохондриального гена 16S рРНК (Beckers et al., 2016). Хотя доступны альтернативные подходы, такие как использование блокаторов ПНК (Fitzpatrick et al., 2018), эффективность снижения амплификации растительного материала все еще была далека от идеальной (Hamonts et al., 2018). Это представляет собой серьезную проблему, поскольку отсутствие демонстрации того, что набор праймеров (799F-1193R) применим для почв и дает результаты, аналогичные результатам с 341F-805R, ограничивая любые попытки сравнить микробиомы почвы и растений. Из-за этого очень важно, чтобы мы исследовали, применим ли стандартный набор грунтовок, используемых для микробиомов растений, к почве, и предоставили ли данные, сопоставимые с обычно используемыми наборами грунтовок для почвы.

Здесь мы стремимся: 1) изучить влияние различных подходов к консервации на анализ микробиома растений и определить лучший метод консервации для поддержания целостности образца и 2) оценить, подходит ли пара растительных праймеров, нацеленная на области V5 – V7, для почвенные микробиомы и обеспечивают в этой среде те же результаты, что и праймеры, нацеленные на область V3 – V4.Чтобы оценить влияние методов консервирования растений, мы реализовали три подхода к консервации, которые обычно используются в исследованиях микробиома растений: а) силикагель, при котором образцы инкубируются при комнатной температуре до полного обезвоживания; б) инкубация на льду в течение 24 ч; и c) мгновенное замораживание в жидком азоте сразу после отбора пробы с последующим переносом до -80 ° C. Для дальнейшей оценки изменчивости микробиома и четкого различия характеристик листьев, которые потенциально могут повлиять на микробиом растений у разных видов, мы выбрали пять видов растений из контрастирующих функциональных групп, включая C3 (валлаби, трава Austrodanthonia caespitosa ) и C4 (трава кенгуру Themeda). triandra и rhodes Chloris gayana ), азотфиксирующая бобовая люцерна ( Medicago sativa ), а также экономически важная культура (хлопчатник Gossypium hirsutum ) для секвенирования ампликона, нацеленного как на бактериальный ген 16S рРНК, так и на грибок. ITS региона, чтобы сравнить микробные сообщества при различных методах сохранения.Для сравнения пар праймеров мы использовали праймеры 341F-805R и 799F-1193R на одних и тех же образцах почвы.

Материалы и методы

Подходы к сохранению растений

Листья растений A. caespitosa , M. sativa , T. triandra и C. gayana были собраны на предприятии «Пастбища и экстремальные климатические условия» (PACE) , Университет Западного Сиднея, Ричмонд, Австралия. Вкратце, каждый вид растений собирали из контрольных блоков монокультуры путем разрезания листьев стерилизованными ножницами перед переносом в асептических условиях в прозрачный пакет с застежкой-молнией.Для методов мгновенного замораживания и инкубации на льду листья растений каждого вида помещали в чистый пакет с застежкой-молнией (n = 6 для каждой обработки) перед немедленным хранением в жидком азоте и на льду, соответственно. Для метода воздушной сушки листья растений каждого вида помещали в бумажный пакет (n = 6) перед хранением в эксикаторе, заполненном силикагелем на дне. Образцы инкубировали приблизительно два дня при комнатной температуре до полного обезвоживания.

Листья, стебли и корни растений хлопчатника ( г.hirsutum , генотип Sicot 71BRF) собирали с двухнедельных растений хлопка (10-15 см высотой), выращенных в теплице с дневной температурой 32 ° C и ночной температурой 25 ° C. Листья хлопка (два верхних листа) и стебли (0–5 см над поверхностью почвы) были срезаны стерилизованными ножницами перед переносом в прозрачные пакеты с застежкой-молнией (n = 6), а корни хлопка были разрезаны и просто промыты дистиллированной водой перед переносом. в прозрачную сумку с замком на молнии. Консервационные обработки проводили, как описано выше.

Взвешивали общее количество 126 замороженных растительных тканей (~ 15 мг сухого веса, мелко нарезанные на кусочки размером ~ 2 мм × 2 мм) и экстрагировали ДНК с помощью набора DNeasy PowerSoil Pro Kit (Qiagen, Hilden, Германия) в соответствии с рекомендациями производителя. инструкции. Качество экстрагированной ДНК проверяли с помощью NanoDrop 2000 (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США), количество проверяли флуорометром Qubit (Thermo Fisher Scientific) и проверяли ПЦР для подтверждения возможности амплификации.

Ампликоны, использующие 799F / 1193R, нацеленные на ген 16S рРНК, нацеленные на область V5-V7 для бактериальных сообществ для уменьшения последовательностей хлоропластов из растительной ткани (Chelius and Triplett, 2001) и области ITS2 (FITS7-ITS4R, Ihrmark et al., 2012) для грибных сообществ были получены с помощью ПЦР.

Применимость набора грунтовок на растительной основе к образцам почвы

Мы использовали 86 образцов почвы, чтобы сравнить, как различные грунтовки влияют на определение сообщества. Эти образцы были получены в ходе эксперимента в теплице, целью которого было оценить, как различные сорта риса, типы почвы и засоленность влияют на микробиомы почвы (неопубликованные данные). ДНК из образцов почвы экстрагировали после сбора урожая, как описано выше для растений (для экстракции использовали 250 мг почвы).Каждый образец почвы собирали в криогенную пробирку из теплицы и хранили при -80 ° C перед экстракцией ДНК. Пары праймеров 341F-805R (Herlemann et al., 2011) и 799F-1193R (Chelius and Triplett, 2001) использовали для амплификации гена 16S рРНК из всех образцов почвы. Были проведены две ПЦР: начальная денатурация при 95 ° C в течение 3 мин, за которыми следовали 25 циклов, состоящих из денатурации (95 ° C в течение 30 с), отжига (95 ° C в течение 30 с) и удлинения (72 ° C в течение 30 с). ) и окончательная выдержка при 72 ° C в течение 5 минут перед объединением образцов для последующего процесса.Все секвенирование (растения и почва) выполняли на предприятии Western Sydney University Next Generation Sequencing (NGS) (Сидней, Австралия) с использованием химии парных концов Illumina MiSeq 2 × 300 п.н. Мнимое сообщество состоит из штаммов, принадлежащих к порядку Bacillales, Lactobacillales, Enterobacteriales Pseudomonadales в следующей пропорции: 47, 28,3, 20,5 и 4,2%, секвенировали с обоими праймерами для оценки достоверности сравнения праймеров. Все необработанные данные о последовательностях, относящиеся к этому исследованию, доступны в базе данных Европейского архива нуклеотидов (Европейский институт биоинформатики, EMBL-EBI) (номер доступаPRJEB38041).

Анализ микробного сообщества

Необработанные данные, полученные на объекте NGS, были обработаны с использованием стандартной рабочей процедуры Mothur (Schloss et al., 2009). Вкратце, прямая и обратная последовательности были объединены в контиги. Последовательности, которые содержали неидентифицированные основания или имели более восьми гомополимеров, были отфильтрованы. Для бактериальных последовательностей применяли дополнительный этап выравнивания последовательностей с версией 132 базы данных генов 16S рРНК Silva (Pruesse et al., 2007) и удаляли невыровненные последовательности.Уточненные последовательности были предварительно кластеризованы (diffs = 1), химеры проверены с помощью UCHIME (Edgar et al., 2011), а синглтон был удален, чтобы уменьшить ошибку (Reeder and Knight, 2009). Последовательности бактерий и грибов были затем таксономически классифицированы в соответствии с базой данных Silva версии 132 и базой данных UNITE версии 8, соответственно, с достоверностью отсечения 60% и последовательностями, которые соответствуют митохондриям хлопка, хлоропластам, архее (бактерии) и участкам ITS хозяина (грибы). были удалены. Оставшиеся последовательности были сгруппированы в операционные таксономические единицы (OTU) со 100% идентичностью, где была назначена таксономия, с получением 80 617 и 25 577 бактериальных и грибковых OTU, соответственно.

Для подходов к сохранению растений матрицы OTU были разрежены до 808 бактериальных и 6736 грибковых последовательностей на образец, соответственно (рисунки S2A, B). Редкие OTU (составляющие менее 0,1% от общей численности) были удалены из матриц OTU, в результате чего было получено 8 218 бактериальных OTU и 3255 грибковых OTU для последующих анализов. Наборы данных были проанализированы с использованием перестановочного многомерного дисперсионного анализа (Anderson, 2001a) в PRIMER v. 6 (PRIMER-E, UK) для сравнения бактериальных и грибковых сообществ при различных методах сохранения (мгновенная заморозка, инкубация на льду и сушка на воздухе).Блочные эффекты, определяющие микробные различия, не учитывались, потому что мы сравнивали только различия между методами консервирования. Матрицы сходства были рассчитаны на основе расстояний Брея-Кертиса по данным численности, преобразованным с квадратным корнем, для сравнения состава и численности структуры сообщества, и на расстояниях Жаккара для сравнения присутствия / отсутствия членов сообщества в PRIMER. В анализе использовалось 9999 перестановок остатков в рамках сокращенной модели (Anderson, 2001b). Парные анализы были выполнены для сравнения различий между методами сохранения, а значения p были скорректированы в соответствии с методом Холма (Holm, 1979), чтобы уменьшить систематическую ошибку, возникающую при статистическом анализе.Анализ перестановочной многомерной дисперсии (PERMDISP) использовался для проверки однородности многомерной дисперсии внутри групп в PRIMER (Anderson, 2006). Альфа- и бета-разнообразие анализировали с помощью пакета R «phyloseq». Визуализация данных, включая графики анализа главных координат (PCoA), была создана на основе расстояния Брея – Кертиса и Жаккара, а таксономический анализ на основе матрицы несходства Брея – Кертиса с тепловой картой был выполнен с использованием пакетов R «phyloseq», «dplyr» и «ggplot2» (Lozupone et al., 2012).

Чтобы определить влияние методов сохранения на доминирующие и редкие таксоны микробов, мы следовали определению из Soliveres et al. (2016) для извлечения доминирующих сообществ (верхние 10% OTU с точки зрения численности) и редких сообществ (нижние 10% OTU) из таблиц OTU, созданных с помощью Mothur, соответственно. PERMANOVA, анализ альфа- и бета-разнообразия применялся в соответствии с описанными выше методами.

Для сравнения двух наборов данных с использованием разных пар праймеров для почвенных бактериальных сообществ, оба набора данных с использованием двух наборов праймеров (341F / 805R и 799F / 1193R) с 12199 и 16229 необработанными бактериальными OTU, соответственно, были сокращены до 8000 последовательностей на образец ( Рисунки S2C, D) с 9317 и 13737 OTU соответственно.Анализ альфа-разнообразия и корреляция между двумя наборами данных, а также тест Mantel, основанный на измерениях Брея-Кертиса, оценивающий корреляцию бета-разнообразия между двумя наборами данных, были проведены в R. Микробный состав также был проанализирован с помощью пакета R «phyloseq».

Результаты

Влияние методов консервации на микробиомы растений

В подходе с сохранением листьев в эксперименте по консервации было проанализировано общее количество 8 218 бактериальных и 3 215 грибковых ОТЕ. Пять образцов ДНК растений были отброшены из-за низкого качества ДНК и плохого считывания секвенирования, что в итоге привело к получению 121 образца.Как правило, не наблюдалось значительных различий в видовом богатстве и однородности между различными методами сохранения, наблюдаемыми по альфа-индексам (Chao1, Shannon and Simpson, Рисунок 1; P> 0,05), за некоторыми исключениями из-за низкого разнообразия (в бактериальных сообществах, Shannon индекс — Сухой ≠ Лед в хлопковом листе, Сухой ≠ Fro = Лед в стебле хлопка, Сухой = Fro ≠ Лед в листе люцерны; Индекс Симпсона — Сухой ≠ Лед в листе хлопка, Сухой ≠ Fro = Лед в стебле хлопка, Fro ≠ Лед в В грибных сообществах индекс Chao1 — Fro ≠ Ice = Сухой в стебле хлопка; индекс Шеннона — Dry = Fro ≠ Лед в листе кенгуру; индекс Симпсона — Fro ≠ Лед в листе кенгуру, P <0.05). При сравнении бактериальной структуры (несходство Брея-Кертиса) между группами образцов и консервативных обработок из тестов PERMANOVA (Таблица 1) не было обнаружено значительных различий (P> 0,05) между консервационными обработками, за исключением листьев люцерны, где мы обнаружили небольшие различия для льда. инкубация и замораживание, инкубация на льду и обработка на воздухе (P <0,05), соответственно, и для корней хлопка между инкубацией на льду и обработкой на воздухе (P <0,05). Тесты PERMDISP показали, что различия в листьях люцерны (F = 5.128, df1 = 2, df2 = 15, P = 0,058) и корни хлопка (F = 1,167, df1 = 2, df2 = 13, P = 0,643), вероятно, были вызваны методами консервации. Что касается бактериальной идентичности (наличие / отсутствие, несходство по Жаккару), не было обнаружено значительных различий между методами консервирования (таблица 1А). Графики PCoA показали разницу в численности и идентичности бактерий, собранных на разных видах растений и тканях (рис. 2A), но были обнаружены различия между методами сохранения в пределах каждого вида растений и тканей, соответствующих тесту PERMANOVA (рис. 3A).В подмножестве доминирующих бактериальных сообществ не было обнаружено значительных различий в различии Брея-Кертиса, за исключением листьев люцерны между методами ледяной инкубации и воздушно-сухого хранения, и не было обнаружено значительных различий между всеми образцами в несходстве Жаккара (Таблица 2A). В подмножестве редких микробных сообществ не было обнаружено значительных различий между всеми образцами в различиях Брея – Кертиса или Жаккара (Таблица 2A). В структуре и составе бактерий нет четких закономерностей между методами сохранения на уровне филума (рис. 4А).

Рис. 1 Индексы альфа-разнообразия (Чао1, Шеннона и Симпсона) сообществ бактерий (A) и грибов (B) при различных методах сохранения. Dry = воздушная сушка (красный), Fro = мгновенное замораживание (зеленый), Ice = инкубация на льду (синий). CoL = лист хлопка, CoR = корень хлопка, CoS = стебель хлопка, KanL = лист кенгуру, LucL = лист люцерны, RhoL = лист родоса, WalL = лист валлаби.

Таблица 1 Попарные анализы PERMANOVA бактериальных (A) и грибковых (B) сообществ на основе измерений Брея – Кертиса и Жаккара относительной численности растительных бактериальных сообществ с преобразованием квадратного корня при различных обработках (мгновенная заморозка, инкубация на льду и воздух сухой)..

Рис. 2 График анализа главных координат (PCoA) с использованием матрицы расстояний Брея – Кертиса и Жаккара на бактериальных сообществах (A) и грибах (B) при различных методах сохранения. Dry = воздушная сушка (красный), Fro = мгновенное замораживание (зеленый), Ice = инкубация на льду (синий). CoL = лист хлопка (сплошной квадрат), CoS = стебель хлопка (закрашенный круг), CoR = корень хлопка (закрашенный треугольник), KanL = лист кенгуру (незакрашенный квадрат), WalL = лист валлаби (крест), RhoL = лист родоса (открытый треугольник), LucL = лист люцерны (белый кружок).

Рис. 3 График анализа индивидуальных главных координат (PCoA) с использованием матрицы расстояний Брея – Кертиса и Жаккара на бактериальных сообществах (A) и грибах (B) при различных методах сохранения.

Таблица 2 Парный анализ PERMANOVA доминантных и редких бактериальных (A) и грибных (B) сообществ на основе измерений Брея – Кертиса и Жаккара относительной численности растительных бактериальных сообществ с преобразованием квадратного корня при различных обработках (мгновенная заморозка, лед инкубация и сушка на воздухе).

Рис. 4 Тепловая карта , показывающая относительную численность бактерий (A) и грибов (B) типов во всех образцах. Dry = воздушная сушка (красный), Fro = мгновенное замораживание (зеленый), Ice = инкубация на льду (синий).

В сообществе грибов не было обнаружено значительных различий ни в структуре сообщества грибов, основанной на несходстве Брея-Кертиса, ни в составе, основанном на несходстве Жаккара (Таблица 1B). Графики PCoA показали одинаковую численность и идентичность грибов для всех видов растений, кроме хлопка (рис. 2B), но были обнаружены различия между методами сохранения в пределах каждого вида растений и тканей, соответствующих тесту PERMANOVA (рис. 3B).Независимо от вида и ткани растений, различные методы консервации не влияли на микробные сообщества. В подмножестве доминантных и редких грибных сообществ не было обнаружено значительных различий ни в различиях Брея-Кертиса, ни в различиях Жаккара во всех доминантных и редких грибных сообществах (Таблица 2B). В структуре и составе грибов нет четкой закономерности между методами сохранения на уровне филума (рис. 4В).

Оценка применимости пар бактериальных праймеров на растительной основе для образцов почвы

Наши результаты показывают, что оба набора праймеров дают аналогичные результаты и что общие данные о составе сообщества из набора праймеров на растительной основе (799F / 1193R) были напрямую сопоставимы с полученный из набора грунтовок 341F / 805R (наборы грунтовок).В целом праймер 799F / 1193R генерировал более высокое альфа-разнообразие, чем 341F / 805R (таблица 3), но тенденции изменения были аналогичными (рисунок S1). Все показатели разнообразия, включая разнообразие Шеннона, богатство (Chao1) и филогенетическое разнообразие Фэйта, сильно коррелировали между двумя наборами праймеров (рисунок S1). Две пары праймеров генерировали один и тот же обильный тип (верхний 12), и на эти типы приходилось 97,5% от общей численности бактерий в обоих наборах данных (рис. 5). Порядок ранжирования обильного типа был сходным для обеих пар праймеров, за исключением двух бактериальных типов (Chloroflexi и Cyanobacteria), способных к фотосинтезу.На уровне OTU состав сообщества сильно коррелировал между двумя наборами данных, и разные пары праймеров не влияли на эффект лечения на состав бактериального сообщества (рис. 6). В результате имитации амплификации сообщества пара праймеров 341F / 805R дала 51,5% бацилл, 19,4% лактобацилл, 24,7% энтеробактерий и 4,4% псевдомонад, тогда как пара праймеров 799F / 1193R дала 42,5% бацилл, 25,1% лактобактерий, 25,6% энтеробактерий. и 6,8% Pseudomonadales (Рисунок S3).Результат бактериального сообщества с использованием двух наборов праймеров показал аналогичные пропорции по сравнению со стандартным фиктивным сообществом, что указывает на достоверность результата.

Таблица 3 Измерение альфа-разнообразия (среднее ± стандартное отклонение) сообществ почвенных бактерий с использованием двух разных пар праймеров.

Рис. 5 Ранжированная относительная численность топ-12 доминантных типов бактерий, определенная парами праймеров 799F / 1193F и 341F / 805R, соответственно. Один и тот же тип, амплифицированный двумя парами праймеров, связан линией.

Рисунок 6 Взаимосвязь между составом сообщества, определенная парами праймеров 799F / 1193F и 341F / 805R. Корреляция Мантеля была выполнена на матрице Брея – Кертиса на уровне OTU.

Обсуждение

Наше исследование предоставляет убедительные доказательства того, что стратегии сохранения оказывают незначительное влияние на микробиомы листьев, стеблей и корней растений для нескольких видов растений, принадлежащих к различающимся функциональным группам (например, C3, C4, N-фиксаторы и т. Д.). . Более того, мы обнаружили, что микробиомы растений и почвы могут быть напрямую сопоставимы в будущих исследованиях, поскольку широко используемый набор праймеров на растительной основе (799F / 1193R) дает результаты, аналогичные результатам, полученным с помощью набора праймеров, широко применяемого в исследованиях почвенного микробиома (341F / 805R) в с точки зрения разнообразия и состава сообществ на контрастных типах почв.Эти результаты подразумевают, что доступны несколько подходов для удовлетворения различных потребностей и логистики исследований без ущерба для надежности результатов. Эта информация имеет решающее значение для преодоления некоторых критических логистических проблем, связанных с крупномасштабными исследованиями микробиома растений в региональном и глобальном масштабах, а также указывает на то, что секвенирование ампликонов для бактериальных сообществ устойчиво к смещению набора праймеров.

Контрастные методы консервации не изменяют структуру микробиома растений

Микробиомы, связанные с тканями растений, изменчивы и могут зависеть от множества факторов, таких как изменения окружающей среды, взаимодействия растений и микробов и взаимодействия микробов и микробов (Singh and Tvedi, 2017; Hamonts и другие., 2018). Основные проблемы, связанные с сохранностью образцов, в основном связаны с повышением температуры (выше -20 ° C) из-за разрушения листьев при высокой температуре, что обычно наблюдается в опадке листьев (Dilly et al., 2001; Voříšková and Baldrian, 2013; Shay, 2016). ). Методы консервации, реализованные в этом исследовании, проверяли диапазон температур консервации, которые в целом не влияли на бактериальные и грибковые сообщества (за исключением бактериального сообщества листа люцерны и корня хлопчатника), связанные с различными частями растений, что позволяет предположить, что надежные данные могут быть получены из все методы консервации, использованные в этом исследовании.

Помимо общих сообществ, мы также исследовали доминирующие и редкие сообщества по отдельности, чтобы избежать упущения потенциальных микробных вариаций от менее распространенных микробов, учитывая потенциальную функциональную роль микробных сообществ в экосистеме (Nazaries et al., 2013; Soliveres и др., 2016). В соответствии с общей структурой сообщества, в доминантных сообществах не изменилась, за исключением бактериальной структуры листьев люцерны (P <0,05, Таблица S1B). Напротив, в редких сообществах не было обнаружено значительных различий между методами сохранения для всех видов растений и тканей.В совокупности небольшие изменения в микробиоме листьев люцерны присутствовали только в доминирующих бактериальных сообществах, но не в редких сообществах, что указывает на то, что наблюдаемые различия были в основном вызваны сдвигами в наиболее распространенных видах, а не в редких.

В микробном составе можно было наблюдать различия между образцами, но не было обнаружено существенной закономерности между методами консервации. Этот результат был согласован как для бактериального, так и для грибкового сообществ (рис. 4). Наши выводы подтверждаются результатами других аналогичных исследований различных биологических материалов, таких как фекалии, почва и насекомых, которые также сообщили о незначительном влиянии температуры, способа хранения и продолжительности на микробные сообщества (Lauber et al., 2010; Доминианни и др., 2014; Хаммер и др., 2015). Таким образом, методы консервации в этом исследовании открыли новую перспективу преодоления трудностей, связанных с отбором массовых проб в региональных или отдаленных районах.

Наборы праймеров на растительной основе сопоставимы с наборами праймеров из почвенных исследований

Выбор праймера — один из ключевых факторов при анализе микробиома. Пары праймеров 341F / 805R и 515F / 806R широко используются для анализа бактериального сообщества человека, насекомых, почв, растений и морских видов (Caporaso et al., 2011; Caporaso et al., 2012; Якобссон и др., 2014; Дельгадо-Бакерисо и др., 2016; Walters et al., 2016; Гомес-Поло и др., 2017; Hamonts et al., 2018; Clerissi et al., 2020), в то время как пара праймеров 799F / 1193R имеет несоответствие двух пар оснований для хлоропласта (Chelius and Triplett, 2001), что больше подходит для анализа микробиома растений.

Однако исследования микробиома растений обычно требуют профилей как почвенного, так и растительного микробиома для связи подземных и надземных микробных сообществ (Liu et al., 2017; Hamonts et al., 2018), которые по существу требуют согласованности с выбранными праймерами. Следовательно, для предварительного удаления загрязнения хлоропластом из ткани растения, пара праймеров 799F / 1193R является предпочтительной в анализах микробиома растений.

В нашем исследовании две пары праймеров показали сходные закономерности относительной численности и состава бактериальных сообществ в образцах почвы (рисунки 5 и 6). Более низкая численность цианобактерий была обнаружена в бактериальном сообществе при использовании пары праймеров 799F / 1193R из-за несоответствия хлоропластов, что было подтверждено в предыдущих исследованиях (Beckers et al., 2016; Thijs et al., 2017). Несмотря на незначительную вариацию нескольких типов бактерий между сообществами с использованием двух разных наборов праймеров, общие бактериальные структуры сильно коррелировали (R 2 = 0,94, P <0,01, рис. 6), что усилило предыдущие данные о более высоком охвате с использованием праймеры, нацеленные на гипервариабельные области V3 – V4 и V5 – V7 (Thijs et al., 2017). Этот результат предполагает, что наборы данных с использованием этих двух пар праймеров для исследований микробиома сопоставимы, и использование пары праймеров 799F / 1193R для исследований микробиома почвы является допустимым.

Заключение

В этом исследовании мы 1) взяли образцы нескольких видов растений с разными функциональными путями и архитектурой листьев, чтобы определить влияние различных методов сохранения на микробиом растений, и 2) оценили достоверность с использованием пары праймеров для растений 799F / 1193R на подход к почвенному микробиому. Методы консервации, использованные в этом исследовании, не повлияли ни на бактериальное, ни на грибное сообщества, и эта закономерность была неизменной для большинства видов растений.Хотя в будущем возможно внедрение более надежных методов консервации, результаты этого исследования могут существенно помочь в крупномасштабном отборе проб в региональном и глобальном масштабе, особенно в отдаленных районах, с использованием метода воздушно-сухой или ледяной инкубации.

Две разные пары праймеров при анализе микробиома бактериальных растений привели к аналогичной численности и составу бактерий, что указывает на то, что пара праймеров несовпадения 799F / 1193R, разработанная для анализа микробиома растений, также может быть использована на других образцах нерастительного происхождения, когда цианобактерии не использовались. считается.Наш результат упростил отбор проб при исследованиях микробиома растений в глобальном масштабе и позволяет исследователям проводить комбинированные анализы микробиома почвы и растений.

Заявление о доступности данных

Все необработанные данные о последовательностях, относящиеся к этому исследованию, доступны в базе данных Европейского архива нуклеотидов (Европейский институт биоинформатики, EMBL-EBI) (номер доступа PRJEB38041).

Вклад авторов

ZQ, JW, MD-B, PT, EE и BS разработали и разработали исследование.ZQ, JW, Y-MC и HZ собрали образцы. ZQ, Y-MC и JW обработали образцы и проанализировали данные. ZQ написал первый вариант рукописи, который был отредактирован всеми соавторами. MD-B, PT и EE отредактировали рукопись. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

Финансирование

Эта работа финансируется грантом Австралийского исследовательского совета (DP170104634).

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fpls.2020.00993/full#supplementary-material

Ссылки

Agler, MT, Ruhe, J., Kroll, S., Morhenn, C., Kim, S.-T., Weigel, D., et al. (2016). Таксоны-концентраторы микробов связывают факторы хозяина и абиотические факторы с изменчивостью микробиома растений. PloS Biol. 14 (1), e1002352. doi: 10.1371 / journal.pbio.1002352

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Андерсон, М.J. (2001a). Новый метод непараметрического многомерного дисперсионного анализа. Austral Ecol. 26 (1), 32–46. doi: 10.1111 / j.1442-9993.2001.01070.pp.x

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Андерсон, М. Дж. (2001b). Перестановочные тесты для одномерного или многомерного дисперсионного и регрессионного анализа. Кан. J. Fisheries Aquat. Sci. 58 (3), 626–639. doi: 10.1139 / f01-004

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Андреоте, Ф. Д., Гумьер, Т., Дуррер, А. (2014). Изучение взаимодействия микробиомов растений. Sci. Агрикола 71 (6), 528–539. doi: 10.1590 / 0103-9016-2014-0195

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Bai, Y., Müller, D. B., Srinivas, G., Garrido-Oter, R., Potthoff, E., Rott, M., et al. (2015). Функциональное перекрытие листовой и корневой микробиоты Arabidopsis. Nature 528 (7582), 364–369. doi: 10.1038 / nature16192

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Bazzicalupo, A.Л., Балинт, М., Шмитт, И. (2013). Сравнение рДНК ITS1 и ITS2 при секвенировании 454 сверхразнообразных грибных сообществ. Fungal Ecol. 6 (1), 102–109. doi: 10.1016 / j.funeco.2012.09.003

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Beckers, B., Op De Beeck, M., Thijs, S., Truyens, S., Weyens, N., Boerjan, W., et al. (2016). Эффективность пар праймеров 16s рДНК при изучении ризосферных и эндосферных бактериальных микробиомов в исследованиях метабаркодирования. Фронт. Microbiol. 7, 650. doi: 10.3389 / fmicb.2016.00650

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кэмпбелл, К. Л., Мамми, Д. Л., Шмидтманн, Э. Т., Уилсон, В. К. (2004). Независимый от культуры анализ микробиоты средней кишки в векторе арбовируса Culicoides sonorensis (Diptera: Ceratopogonidae). J. Med. Энтомол. 41 (3), 340–348. doi: 10.1603 / 0022-2585-41.3.340

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Caporaso, J. G., Лаубер, К. Л., Уолтерс, В. А., Берг-Лайонс, Д., Лозупоне, К. А., Тернбо, П. Дж. И др. (2011). Глобальные паттерны разнообразия 16S рРНК на глубине миллионов последовательностей на образец. Proc. Natl. Акад. Sci. U. States America 108, 4516–4522. doi: 10.1007 / s002480000087

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Caporaso, J. G., Lauber, C. L., Walters, W. A., Berg-Lyons, D., Huntley, J., Fierer, N., et al. (2012). Сверхвысокопроизводительный анализ микробного сообщества на платформах Illumina HiSeq и MiSeq. ISME J. 6 (8), 1621–1624. doi: 10.1038 / ismej.2012.8

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Chelius, M., Triplett, E. (2001). Разнообразие архей и бактерий в ассоциации с корнями Zea mays L. Microb. Ecol. 41 (3), 252–263.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Clerissi, C., De Lorgeril, J., Petton, B., Lucasson, A., Escoubas, J.-M., Gueguen, Y., et al. (2020). Состав и равномерность микробиоты позволяют прогнозировать выживаемость устриц, столкнувшихся с синдромом смертности тихоокеанских устриц. Фронт. Microbiol. 11, 311. doi: 10.3389 / fmicb.2020.00311

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Колла, Г., Хоугланд, Л., Руцци, М., Кардарелли, М., Бонини, П., Канагье, Р. и др. (2017). Биостимулирующее действие белковых гидролизатов: выяснение их влияния на физиологию растений и микробиом. Фронт. Plant Sci. 8, 2202. doi: 10.3389 / fpls.2017.02202

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Compant, S., Клеман, К., Сессич, А. (2010). Бактерии, способствующие росту растений в ризо- и эндосфере растений: их роль, колонизация, задействованные механизмы и перспективы использования. Soil Biol. Biochem. 42 (5), 669–678. doi: 10.1016 / j.soilbio.2009.11.024

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Delgado-Baquerizo, M., Maestre, F. T., Reich, P. B., Jeffries, T. C., Gaitan, J. J., Encinar, D., et al. (2016). Разнообразие микробов способствует многофункциональности наземных экосистем. Nat. Commun. 7, 10541. doi: 10.1038 / ncomms10541

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Дилли, О., Бартч, С., Розенброк, П., Бускот, Ф., Мунк, Дж. К. (2001). Изменение физиологических возможностей микробиоты при разложении опада в лесу ольхи черной (Alnus glutinosa (Gaertn.) L.). Soil Biol. Biochem. 33 (7-8), 921–930. doi: 10.1016 / S0038-0717 (00) 00239-X

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Эдгар Р.К., Хаас, Б. Дж., Клементе, Дж. С., Айва, К., Найт, Р. (2011). UCHIME улучшает чувствительность и скорость обнаружения химер. Биоинформатика 27 (16), 2194–2200. doi: 10.1093 / биоинформатика / btr381

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Estes, A. M., Hearn, D. J., Snell-Rood, E. C., Feindler, M., Feeser, K., Abebe, T., et al. (2013). Передача членов микробиома навозным жуком, Onthophagus taurus (Coleoptera: Scarabaeidae) через клубок расплода. PloS One 8 (11), e79061. doi: 10.1371 / journal.pone.0079061

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Feng, W., Rong, F., Passey, T., Hu, X.-P., Xu, X. (2016). Идентификация почвенных микробов-кандидатов, ответственных за мелкомасштабную неоднородность роста клубники. J. Integr. Agric. 15 (9), 2049–2058. doi: 10.1016 / S2095-3119 (16) 61354-0

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Fitzpatrick, C. R., Lu-Irving, P., Copeland, J., Guttman, D. S., Wang, P. W., Baltrus, D. A., et al. (2018). Вариации последовательности хлоропластов и эффективность пептидных нуклеиновых кислот для блокирования амплификации хозяина в исследованиях микробиома растений. Микробиом 6 (1), 1–10. doi: 10.1186 / s40168-018-0534-0

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Gomez-Polo, P., Ballinger, M. J., Lalzar, M., Malik, A., Ben-Dov, Y., Mozes-Daube, N., et al. (2017). Исключительное семейство: родственный офиокордицепсу гриб доминирует в микробиоме мягких щитовок (Hemiptera: Sternorrhyncha: Coccidae). Мол. Ecol. 26 (20), 5855–5868. doi: 10.1111 / mec.14332

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Hammer, T. J., Dickerson, J. C., Fierer, N. (2015). Основанные на фактах рекомендации по хранению и обращению с образцами для анализа микробиоты насекомых. PeerJ 3, e1190. doi: 10.7717 / peerj.1190

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хамонц, К., Триведи, П., Гарг, А., Яниц, К., Гриньер, Дж., Холфорд, П., и другие. (2018). Полевое исследование показывает микробиоту основных растений и относительную важность их движущих сил. Environ. Microbiol. 20 (1), 124–140. doi: 10.1111 / 1462-2920.14031

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Херлеманн, Д. П., Лабренц, М., Юргенс, К., Бертилссон, С., Ваник, Дж. Дж., Андерссон, А. Ф. (2011). Переходы в бактериальных сообществах вдоль 2000 км градиента солености Балтийского моря. ISME J. 5 (10), 1571–1579. DOI: 10.1038 / ismej.2011.41

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Holm, S. (1979). Простая процедура многократного последовательного отбраковки. Скандинавский J. Stat. 6 (2), 65–70.

Google Scholar

Ihrmark, K., Bödeker, I., Cruz-Martinez, K., Friberg, H., Kubartova, A., Schenck, J., et al. (2012). Новые праймеры для амплификации области ITS2 грибов — оценка с помощью секвенирования 454 искусственных и естественных сообществ. FEMS Microbiol.Ecol. 82 (3), 666–677. doi: 10.1111 / j.1574-6941.2012.01437.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Jakobsson, H. E., Abrahamsson, T. R., Jenmalm, M. C., Harris, K., Quince, C., Jernberg, C., et al. (2014). Снижение разнообразия кишечной микробиоты, задержка колонизации Bacteroidetes и снижение ответа Th2 у младенцев, рожденных с помощью кесарева сечения. Кишечник 63 (4), 559–566. doi: 10.1136 / gutjnl-2012-303249

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кёберл, М., Шмидт, Р., Рамадан, Э. М., Бауэр, Р., Берг, Г. (2013). Микробиом лекарственных растений: разнообразие и важность для роста, качества и здоровья растений. Фронт. Microbiol. 4, 400. doi: 10.3389 / fmicb.2013.00400

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Каушал, М., Свеннен, Р., Махуку, Г. (2020). Разблокирование микробиомных сообществ банана (Musa spp.) В стрессовых (фузариозное увядание) и нестрессовых условиях. Микроорганизмы 8 (3), 443.doi: 10.3390 / microorganisms8030443

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кох, Х., Аброл, Д. П., Ли, Дж., Шмид-Хемпель, П. (2013). Разнообразие и закономерности эволюции кишечных бактерий пчел-корбикулятов. Мол. Ecol. 22 (7), 2028–2044. doi: 10.1111 / mec.12209

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лаубер, К. Л., Чжоу, Н., Гордон, Дж. И., Найт, Р., Фирер, Н. (2010). Влияние условий хранения на оценку структуры бактериального сообщества в почвенных и антропогенных пробах. FEMS Microbiol. Lett. 307 (1), 80–86. doi: 10.1111 / j.1574-6968.2010.01965.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лю, Х., Карвалейс, Л. К., Шенк, П. М., Деннис, П. Г. (2017). Эффекты передачи сигналов жасмоновой кислоты на микробиом пшеницы различаются в зависимости от участка тела. Sci. Реп. 7 (1), 1–8. doi: 10.1038 / srep41766

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Lozupone, C. A., Stombaugh, J. I., Gordon, J.И., Янссон, Дж. К., Найт, Р. (2012). Разнообразие, стабильность и устойчивость микробиоты кишечника человека. Природа 489 (7415), 220–230. doi: 10.1038 / nature11550

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Маяк, С., Тирош, Т., Глик, Б. Р. (2004). Бактерии, способствующие росту растений, придают растениям томатов устойчивость к солевому стрессу. Plant Physiol. Biochem. 42 (6), 565–572. doi: 10.1016 / j.plaphy.2004.05.009

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Назарис, Л., Pay, Y., Bordrossy, L., Baggs, E.M., Millard, P., Murrell, J.C., et al. (2013). Доказательства микробной регуляции биогеохимических циклов из исследования потоков метана и изменений в землепользовании. Заявл. Environ. Microbiol. 79, 4031–4040. doi: 10.1128 / AEM.00095-13

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Pruesse, E., Quast, C., Knittel, K., Fuchs, B.M., Ludwig, W., Peplies, J., et al. (2007). SILVA: всеобъемлющий онлайн-ресурс для проверенных и согласованных данных о последовательностях рибосомных РНК, совместимых с ARB. Nucleic Acids Res. 35 (21), 7188–7196. doi: 10.1093 / nar / gkm864

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Цю, З., Эгиди, Э., Лю, Х., Каур, С., Сингх, Б. К. (2019). Новые рубежи продуктивности сельского хозяйства: оптимизированные микробные инокулянты и инженерия микробиома in situ. Biotechnol. Adv. 37 (6), 107371. doi: 10.1016 / j.biotechadv.2019.03.010

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Розье, А., Бишной, У., Лакшманан, В., Шерьер, Д. Дж., Байс, Х. П. (2016). Перспектива передачи сигналов между царствами при взаимодействии растений с полезными микробами. Plant Mol. Биол. 90 (6), 537–548. doi: 10.1007 / s11103-016-0433-3

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сандерс, Дж. Г., Пауэлл, С., Кронауэр, Д. Дж., Васконселос, Х. Л., Фредериксон, М. Е., Пирс, Н. Е. (2014). Стабильность и филогенетическая корреляция микробиоты кишечника: уроки муравьев и обезьян. Мол. Ecol. 23 (6), 1268–1283. doi: 10.1111 / mec.12611

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Schloss, P. D., Westcott, S. L., Ryabin, T., Hall, J. R., Hartmann, M., Hollister, E. B., et al. (2009). Представляем mothur: программное обеспечение с открытым исходным кодом, независимое от платформы и поддерживаемое сообществом для описания и сравнения микробных сообществ. Заявл. Environ. Microbiol. 75 (23), 7537–7541. doi: 10.1128 / aem.01541-09

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шмаленбергер, А., Ходж, С., Брайант, А., Хоуксфорд, М. Дж., Синг, Б. К., Кертес, М. А. (2008). Роль Variovorax и других Comamonadaceae в трансформациях серы микробными сообществами ризосферы пшеницы, подвергающимися различным режимам удобрения серой. Environ. Microbiol. 10 (6), 1486–1500. doi: 10.1111 / j.1462-2920.2007.01564.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Schmidt, R., Köberl, M., Mostafa, A., Ramadan, E.M., Monschein, M., Jensen, K. B., и другие. (2014). Влияние бактериальных инокулянтов на местный микробиом и вторичные метаболиты растений ромашки. Фронт. Microbiol. 5, 64. doi: 10.3389 / fmicb.2014.00064

PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сессич, А., Миттер, Б. (2015). Сельское хозяйство 21 века: интеграция микробиомов растений для улучшения растениеводства и продовольственной безопасности. Microbial Biotechnol. 8 (1), 32. doi: 10.1111 / 1751-7915.12180

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Shay, P.-Е. (2016). Влияние конденсированных танинов, азота и климата на гниение, минерализацию азота и микробные сообщества в опадке листьев лесных деревьев. [диссертация / кандидатская диссертация]. [Чикаго (Иллинойс)]: Университет Виктории.

Google Scholar

Сингх Б. К., Триведи П. (2017). Микробиом и будущее продовольственной безопасности и безопасности питательных веществ. Microbial Biotechnol. 10, 50–53. doi: 10.1111 / 1751-7915.12592

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Соливерес, С., Мэннинг, П., Прати, Д., Госснер, М., М., Альт, Ф., Арндт, Х. и др. (2016). Локально редкие виды влияют на многофункциональность экосистемы пастбищ. Philos. Пер. R. Soc. В: Биол. Sci. 371 (1694), 20150269. doi: 10.1098 / rstb.2015.0269

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Song, S. J., Amir, A., Metcalf, J. L., Amato, K. R., Xu, Z. Z., Humphrey, G., et al. (2016). Методы консервации различаются по стабильности фекального микробиома, что влияет на пригодность для полевых исследований. м Системы 1 (3), e00021-16. DOI: 10.1128 / mSystems.00021-16

PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Суарес-Морено, З. Р., Кабальеро-Мелладо, Дж., Коутиньо, Б. Г., Мендонса-Превиато, Л., Джеймс, Э. К., Вентури, В. (2012). Общие черты окружающей среды и потенциально полезных растений Burkholderia. Microbial Ecol. 63 (2), 249–266. doi: 10.1007 / s00248-011-9929-1

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Thijs, S., Оп Де Бек, М., Бекерс, Б., Труйенс, С., Стивенс, В., Ван Хамм, Дж. Д. и др. (2017). Сравнительная оценка четырех пар специфичных для бактерий праймеров для исследований гена 16S рРНК. Фронт. Microbiol. 8, 494. doi: 10.3389 / fmicb.2017.00494

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Тимм, К. М., Пеллетье, Д. А., Джоуди, С. С., Гюнтер, Л. Е., Хеннинг, Дж. А., Энгл, Н. и др. (2016). Два бактериальных изолята, ассоциированных с тополем, вызывают дополнительные благоприятные реакции в сконструированной системе растение-микробиом. Фронт. Plant Sci. 7, 497. doi: 10.3389 / fpls.2016.00497

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Walters, W., Hyde, E. R., Berg-Lyons, D., Ackermann, G., Humphrey, G., Parada, A., et al. (2016). Улучшенный бактериальный ген 16S рРНК (V4 и V4-5) и праймеры для внутреннего транскрибированного гена спейсерного маркера грибов для исследований микробного сообщества. Msystems 1 (1), e00009 – e00015. doi: 10.1128 / mSystems.00009-15

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Weyens, N., Ван дер Лели, Д., Тагави, С., Ньюман, Л., Вангронсвельд, Дж. (2009). Использование партнерских отношений между растениями и микробами для улучшения производства биомассы и восстановления. Trends Biotechnol. 27 (10), 591–598. doi: 10.1016 / j.tibtech.2009.07.006

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Патент США на композицию бесцветной грунтовки и патент на метод (Патент № 7,648,603, выданный 19 января 2010 г.)

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение в целом относится к композиции грунтовки и, в частности, к бесцветной композиции грунтовки, которая может быть использована для получения стойкой обнаруживаемой грунтовки, которая будет использоваться в строительной отрасли для определения надлежащего состояния пластмассы. труба, которая не оставит видимых пятен.

Пурпурная грунтовка — широко известный продукт, применяемый в сантехнике и строительстве. Он используется для надлежащего кондиционирования пластиковой трубы, такой как ПВХ (поливинилхлорид) или ХПВХ (хлорированный ПВХ), перед соединением двух отдельных труб цементированным швом.

В соответствии со стандартами Американского общества испытаний и материалов («ASTM») D2564, D2235, D3138 и F493, пластиковые трубы из ПВХ или ХПВХ необходимо очистить и подготовить перед их соединением с помощью цементного связующего для пластиковых труб. Пурпурная грунтовка играет важную роль в этом процессе, поскольку она смягчает или повышает клейкость поверхности пластиковой трубы, обеспечивая более эффективное сплавление двух труб за счет образования цементного соединения.Стандарты ASTM требуют использования грунтовки на основе растворителя, которая может эффективно удалять с поверхности грязь, жир и сажу и смягчать поверхность пластиковой трубы, чтобы при нанесении цемента для пластиковых труб образовалась прочная, воздухонепроницаемая и водонепроницаемая связь. . Традиционная грунтовка обычно включает растворители, такие как тетрагидрофуран, метилэтилкетон, ацетон, циклогексанон или N-метилпиррилидон, в которых смола ПВХ или ХПВХ растворена вместе с наполнителями, стабилизаторами и красителями.

Традиционные грунтовки основаны на прозрачных бесцветных растворителях, таких как ацетон или метилэтилкетон (МЭК), и цветном перманентном красителе, обычно пурпурного цвета.Цветной краситель не имеет никакого другого функционального назначения, кроме окрашивания труб, чтобы инспектор мог визуально подтвердить нанесение грунтовки перед нанесением цемента. Отраслевые стандарты, такие как Единый сантехнический кодекс (UPC) и Международный сантехнический кодекс (IPC), требуют использования перманентной грунтовки фиолетового цвета в процессе изготовления прочной цементированной связи для труб. Поскольку проверка на строительной площадке может проводиться в день или время, отличное от времени фактического цементирования, инспектор полагается на наличие пурпурного цвета на стыках труб в качестве доказательства того, что грунтовка была нанесена должным образом.

Традиционные пурпурные грунтовки позволяют проводить быстрый визуальный осмотр. Стойкий цветной краситель в грунтовке нельзя удалить с помощью воды или других систем растворителей. Окраску нельзя удалить шлифованием наждачной бумагой или другой абразивной средой, не повредив нанесенные поверхности. Хотя постоянство пурпурного цвета необходимо, оно также может быть неприятной характеристикой традиционных пурпурных грунтовок.

Из-за стойкости красителя традиционные пурпурные грунтовки сразу же оставляют стойкое пурпурное пятно на любой пористой или пластиковой поверхности, такой как столешницы, виниловые полы и / или ковры, при контакте.Пятно нельзя удалить никаким обычным методом очистки, не повредив испачканную поверхность. Это было серьезной проблемой при строительстве, ремонте дома или других процессах, потому что грунтовка часто контактирует с пористыми или пластиковыми поверхностями в результате непреднамеренного нанесения или случайного разлива, оставляя пластиковые или пористые поверхности с неприглядными пятнами. Хотя пятна на трубах можно скрыть за готовыми стенами, другие окрашенные поверхности часто приходится полностью заменять.

Из-за этого необратимого последствия существует потребность в нержавеющей, но стойкой, легко обнаруживаемой пурпурной грунтовке.

Соответственно, желательно обеспечить улучшенную не имеющую пятен пурпурную грунтовку, которая преодолевает недостатки и недостатки предшествующего уровня техники.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Вообще говоря, в соответствии с изобретением предоставляется грунтовка с бесцветным красителем, обнаруживаемым только в черном свете. Настоящее изобретение не обнаруживается на пористой поверхности, и цвет не проявляется со временем при воздействии естественного или синтетического света. Однако под черным светом, иногда называемым ультрафиолетовой энергией или длинноволновым черным светом, бесцветный краситель выглядит как, e.г., пурпурный. Однако после удаления черного света грунтовка перестает светиться и возвращается в свое естественное бесцветное состояние. Это может удовлетворить строительного инспектора, не нанося необратимого повреждения многим поверхностям.

Бесцветная грунтовка в соответствии с изобретением может быть составлена ​​с включением выбранных подходящих красителей, которые флуоресцируют в черном свете для получения пурпурного цвета, соответствующего строительным нормам IPC и UPC. Такие красители предпочтительно растворимы в стандартных растворителях, используемых в производстве грунтовок, таких как циклогексанон, ТГФ, ацетон или МЭК, для грунтования пластиковых труб.Подходящие растворители не должны мешать процессу грунтовки, как описано в ASTM D2564 или F403. Предпочтительные красители реагируют на черный свет, когда черный свет подается от простого фонаря с черным светом с разумного расстояния, например, менее трех футов, чтобы инспектор мог провести визуальный осмотр.

Выбранный краситель или красители должны быть стабильными в течение продолжительных периодов времени в растворе растворителя грунтовки и при воздействии света или воздуха. При нанесении на пористую поверхность, такую ​​как винил или камень, выбранные красители не должны приводить к изменению цвета с течением времени под воздействием естественного света, лампы накаливания или флуоресцентного света.Выбранные красители также должны быть безопасными для использования в соответствии со стандартами NSF 61 для питьевой воды.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение направлено на бесцветные композиции грунтовки и способы использования таких композиций с пластиковыми трубами перед соединением труб с помощью клея. Как будет очевидно специалистам в данной области техники, возможны замены, пропуски и добавления, чтобы обеспечить адгезивы с индивидуально подобранными свойствами.

Предпочтительные варианты осуществления изобретения должны включать, но не ограничиваются ими, компонент растворителя и компонент красителя. Композиции в соответствии с изобретением могут также включать компонент УФ-светостабилизатора. Включение компонента УФ-светостабилизатора не обязательно для работы грунтовки.

Компонент растворителя в соответствии с предпочтительными вариантами осуществления изобретения может включать комбинацию растворителей, обычно используемых в грунтовках в сантехнической и строительной промышленности.Предпочтительные растворители могут включать комбинации 0-80% тетрагидрофурана (THF), 0-80% циклогексанона (CYH), 0-100% ацетона и / или 0-100% метилэтилкетона (MEK), предпочтительно 1-20% тетрагидрофурана ( THF), 1-20% циклогексанона (CYH) и 20-50% ацетона и 20-50% метилэтилкетона (MEK), наиболее предпочтительно 5-15% тетрагидрофурана (THF), 5-15% циклогексанона (CYH) и по 35-45% ацетона и метилэтилкетона (MEK). Из них наиболее предпочтительной смесью является 10% тетрагидрофурана, 10% циклогексанона, 40% метилэтилкетона и 40% ацетона.

Краситель может включать однокомпонентный краситель или многокомпонентный комбинированный краситель. Оба компонента должны флуоресцировать в черном свете, чтобы иметь пурпурный цвет, соответствующий строительным нормам IPC и UPC. Примером красителя является комбинация DFSB-C7 (красный), DFSB-C0 (синий) и DFLQ-C2 (желтый), поставляемая Risk Reactor из Хантингтон-Бич, Калифорния. Однокомпонентные красители, такие как LX 10522 Pylakrome white или S 5 Pylakor White, поставляемый Pylam Products Company, Inc.из Темпе, Аризона, также являются примерами красителей, подходящих для бесцветной пурпурной грунтовки. Предпочтительный компонент красителя включает комбинацию красного красителя и синего красителя, такого как DFSB-C7 и DFSB-C0, каждый с общей массой в диапазоне 0,00005-0,02%, предпочтительно между 0,0001-0,1% смеси растворителей. Соотношение синего и красного красителей может варьироваться от 4: 1 до 1: 4. Предпочтительное соотношение для наилучшего выражения пурпурного цвета составляет примерно 1: 1.

Красители, используемые в настоящем изобретении, не должны мешать процессу грунтовки, как описано в ASTM D2564 или F403.Они должны быть безопасными для питьевой воды в соответствии с NSF 61. Эти красители должны реагировать на черный свет, когда черный свет попадает от простого фонаря с черным светом на разумном расстоянии (например, менее трех футов), чтобы инспектор мог выполнить визуальный осмотр. Выбранный краситель или красители также должны обладать свойством стабильности в течение продолжительных периодов времени в растворе растворителя грунтовки, даже при воздействии света или воздуха. При нанесении на пористую поверхность, такую ​​как винил или камень, эти красители не должны приводить к изменению цвета с течением времени при воздействии естественного, лампы накаливания или флуоресцентного света.Предпочтительные композиции будут оставаться бесцветными на поверхностях, таких как ПВХ, более шести месяцев для целей тестирования, предпочтительно более года.

Пример композиции бесцветной грунтовки включает комбинацию ацетона и МЭК с минимальным количеством красного красителя (DFSB-C7) и синего красителя (DFSB-C0), то есть примерно в соотношении 1: 1, что в сумме составляет 0,0001% смесь растворителей.

Бесцветная грунтовка в соответствии с изобретением также может преимущественно включать УФ-стабилизатор. Хотя выбранные красители не должны проявлять нестабильности ни при хранении, ни при воздействии воздуха или света, УФ-стабилизатор может быть добавлен в качестве меры предосторожности для обеспечения стабильности.Компонент УФ-светостабилизатора представлен классом светостабилизаторов на основе затрудненных аминов (HALS). Примеры предпочтительных УФ-светостабилизаторов включают фосфит на основе затрудненного фенола, такой как Irganox 1010, поставляемый Ciba Geigy из Хоторна, штат Нью-Йорк, и / или затрудненный хинон, примером которого является Irgafos 168, также поставляемый Ciba Geigy из Хоторна, штат Нью-Йорк. Irganox 1010 в количестве 0,005-0,2 мас.%, Наиболее предпочтительно 0,01-0,1% смеси растворителей.

Бесцветная грунтовка не требует специального обращения или упаковки.Он должен поставляться в стандартном металлическом контейнере с тампоном, который используется в настоящее время в промышленности. Примерами мазков и банок являются мазки, поставляемые National Novelty Brush, Ланкастер, Пенсильвания, и металлические банки Prime Packaging Group, Кирни, штат Нью-Джерси

Бесцветный грунт можно наносить точно так, как описано в ASTM F656. Введение флуоресцентного красителя не должно изменять рутинные операции пользователя, как описано в ASTM F656. После нанесения и высыхания мельчайшие уровни флуоресцентного красителя, оставшиеся на поверхности пластиковой трубы, должны реагировать на черный свет и проявлять цвет под черным светом.Удаление черного света возвращает пластиковую трубу в естественное бесцветное состояние.

Примерами черного света, используемого для индукции флуоресценции нанесенного праймера, является вспышка модели № BNBNS, поставляемая Risk Reactor из Хантингтон-Бич, Калифорния, или перьевой свет модели № BL-900, поставляемый Fortune Products, Inc., Лейк Стивенс, Вашингтон. Черный свет Модель № BNBNS рекомендуется из-за удобного размера и освещения.

В отличие от традиционной пурпурной грунтовки, используемой в промышленности, появление пурпурного цвета должно создаваться только за счет применения черного света.Краситель должен быть выбран таким образом, чтобы, если бесцветная грунтовка, содержащая флуоресцентный краситель, случайно нанесена или пролита на пористую поверхность, отличную от пластиковой трубы, при испарении растворителя, хотя флуоресцентный краситель остается на пористой поверхности, он не должен реагировать к широкому диапазону света, например естественному свету, свету накаливания или свету люминесцентных ламп. Таким образом, при нормальном освещении пораженные поверхности должны выглядеть бесцветными.

Устойчивость к любому перманентному развитию пурпурного цвета проверялась в течение одного года, при этом не было появления пурпурного цвета, вызванного присутствием света, кроме черного.

Следующий пример предоставляется только с целью иллюстрации и не предназначен для толкования как ограничение объема изобретения.

ТАБЛИЦА 1 ПРИМЕР СОСТАВА БЕСЦВЕТНОЙ ПРАЙМЕРА Компоненты,% по массе Прозрачный красный краситель DFSB-C70,0006% Прозрачный синий краситель DFSB-C00.0006% Тетрагидрофуран 10% Циклогексанон 905 7% Метилэтил-40

Стабильность бесцветной пурпурной грунтовки к источнику света, отличному от черного света, измеряется путем проведения испытаний на экспозицию с использованием различных источников света.На секции труб из ХПВХ и ПВХ был нанесен бесцветный грунт, указанный в Таблице 1. Затем эти секции подвергались воздействию различных источников света, включая естественный свет, лампы накаливания и флуоресцентные лампы, чтобы проверить, может ли воздействие света, отличного от черного света. в появлении цвета, родственного красителю. Во время испытаний участки, покрытые грунтовкой, периодически подвергаются воздействию черного света, чтобы гарантировать, что флуоресцентный краситель не испортился и все еще был виден в черном свете.Как видно из Таблицы 2, в течение одногодичного периода тестирования генерации какого-либо цвета не наблюдалось. Активность флуоресцентного красителя не ухудшалась и поддерживалась в течение одного года исследования.

ТАБЛИЦА 2 РЕЗУЛЬТАТЫ ИСПЫТАНИЙ НА ВОЗДЕЙСТВИЕ Источник света 1 месяц 4 месяца 6 месяцев 12 месяцев Естественный свет Нет цвета Нет цвета Нет цвета Нет цвета Раскаленный Нет цвета Нет цвета Нет цвета Нет цвета мл образцов бесцветного пурпурного прайм-состава помещали в две колбы Эрленмейера на 1 л.В первой колбе образец бесцветной грунтовки подвергали сжатию через газовую фритту. Это продолжалось в течение 24 часов. Во второй колбе в колбу добавляли 10 мас.% Дистиллированной воды и затем раствор подвергали воздействию сжатого воздуха в течение 24 часов. Через 24 часа два примера грунтовки из колб были нанесены на купоны из ПВХ, высушены и подвергнуты воздействию черного света. В обоих случаях применение черного света вызывало флуоресцентное поведение, проявляющее желаемый цвет.

Третий тест был проведен для проверки характеристик бесцветной грунтовочной композиции по ASTM D-XXXX. Используя грунтовку, описанную в Таблице 1, сборку трубы из ПВХ использовали для испытаний при различных давлениях и жидкостях, содержащихся в трубе. В комплект трубопровода входила 2-дюймовая труба из ПВХ. На одном конце трубы была подсоединена торцевая заглушка и герметизирована бесцветным пурпурным грунтом и обычным цементом для труб из ПВХ с обычным отверждением. Другой конец трубы из ПВХ был подсоединен к гидравлическому насосу.Используемый гидравлический насос представлял собой Simpson Model № 70, производимый Templeton, Kelly and Co. из Бродвью, штат Иллинойс, который способен создавать давление до 10 000 фунтов на квадратный дюйм. Игольчатый клапан и манометр были подключены между гидравлическим насосом и трубкой из ПВХ для контроля и измерения давления.

Испытание проводилось при давлении 80 фунтов на квадратный дюйм дважды: один раз, когда в трубном узле находился воздух, и один раз, когда в трубном узле содержалась вода. Давление держали 24 часа. В обоих случаях давление поддерживали в течение испытанного периода времени, демонстрируя, что бесцветная пурпурная грунтовка не теряет желаемые характеристики с течением времени.

Таким образом, будет видно, что задачи, изложенные выше, среди тех, которые стали очевидными из предыдущего описания, эффективно достигаются, и, поскольку определенные изменения могут быть внесены в осуществление вышеуказанного способа и в составы, изложенные без отклонения от сущности и объема изобретения, предполагается, что все содержание, содержащееся в приведенном выше описании и показанное на прилагаемых чертежах, должно интерпретироваться как иллюстративное, а не в ограничивающем смысле.

Также следует понимать, что нижеследующая формула изобретения предназначена для охвата всех общих и конкретных признаков изобретения, описанных здесь, и всех положений объема изобретения, которые, говоря языком, можно сказать, что они не подходят. между ними.

В частности, следует понимать, что в указанной формуле изобретения ингредиенты или соединения, перечисленные в единственном числе, предназначены для включения совместимых смесей таких ингредиентов, где позволяет смысл.

Пространственное картирование белкового состава и организации ткани: праймер для мультиплексной визуализации на основе антител

  • 1.

    Stack, EC, Wang, C., Roman, KA & Hoyt, CC Мультиплексная иммуногистохимия, визуализация и количественный анализ: обзор, с оценкой усиления тирамидного сигнала, мультиспектральной визуализацией и мультиплексным анализом. Методы 70 , 46–58 (2014).

    CAS PubMed Google ученый

  • 2.

    Thul, P.J. et al. Субклеточная карта протеома человека. Наука 356 , eaal3321 (2017).

    PubMed Google ученый

  • 3.

    Гавад, К., Кох, В. и Квейк, С. Р. Секвенирование одноклеточного генома: современное состояние науки. Nat.Преподобный Жене. 17 , 175–188 (2016).

    CAS PubMed Google ученый

  • 4.

    Massonnet, P. & Heeren, R. M. A. Краткий учебный обзор молекулярной и клеточной визуализации на основе TOF-SIMS. J. Anal. Спектром. 34 , 2217–2228 (2019).

    CAS Google ученый

  • 5.

    Нойман, Э. К., До, Т. Д., Коми, Т. Дж. И Свидлер, Дж.V. Изучение фундаментальных структур жизни: нецелевой, химический анализ отдельных клеток и субклеточных структур. Angew. Chem. Int. Эд. 58 , 9348–9364 (2019).

    CAS Google ученый

  • 6.

    Zhang, L. & Vertes, A. Подходы одноклеточной масс-спектрометрии для изучения клеточной гетерогенности. Angew. Chem. Int. Эд. 57 , 4466–4477 (2018).

    CAS Google ученый

  • 7.

    Porwit, A. & Béné, M. C. Применение многопараметрической проточной цитометрии в диагностике острого лейкоза со смешанным фенотипом. Cytom. Часть B: Clin. Cytom. 96 , 183–194 (2019).

    Google ученый

  • 8.

    Bandura, D. R. et al. Масс-цитометрия: метод многоцелевого иммуноанализа отдельных клеток в реальном времени, основанный на времяпролетной масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой. Анал. Chem. 81 , 6813–6822 (2009).

    CAS PubMed Google ученый

  • 9.

    Колодзейчик, А. А., Ким, Дж. К., Свенссон, В., Мариони, Дж. К. и Тейхманн, С. А. Технология и биология секвенирования одноклеточной РНК. Мол. ячейка 58 , 610–620 (2015).

    CAS PubMed Google ученый

  • 10.

    Stoeckius, M. et al. Одновременное измерение эпитопа и транскриптома в отдельных клетках. Nat. Методы 14 , 865–868 (2017).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 11.

    Taube, J. M. et al. Заявление Общества иммунотерапии рака о передовых методах множественной иммуногистохимии (IHC) и иммунофлуоресценции (IF) окрашивания и валидации. J. Immunother. Рак 8 , e000155 (2020).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 12.

    Гольцев Ю.В. и др. Глубокое профилирование архитектуры селезенки мыши с помощью мультиплексной визуализации CODEX. Ячейка 174 , 968–981.e915 (2018).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 13.

    van den Brink, S.C. et al. Секвенирование отдельных клеток выявляет экспрессию генов, вызванную диссоциацией, в тканевых субпопуляциях. Nat. Методы 14 , 935–936 (2017).

    PubMed Google ученый

  • 14.

    Гернер, М. Ю., Кастенмюллер, В., Ифрим, И., Кабат, Дж. И Жермен, Р. Н. Гистоцитометрия: метод высоко мультиплексного количественного анализа изображений тканей, применяемый для микроанатомии подмножества дендритных клеток в лимфатических узлах. Иммунитет 37 , 364–376 (2012).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 15.

    Asp, M., Bergenstråhle, J. & Lundeberg, J. Транскриптомы с пространственным разрешением — инструменты нового поколения для исследования тканей. BioEssays 42 , 1

    1 (2020).

    Google ученый

  • 16.

    Маркс В. Метод года: пространственно разрешенная транскриптомика. Nat. Методы 18 , 9–14 (2021 г.).

    CAS PubMed Google ученый

  • 17.

    Uhlén, M. et al. Тканевая карта протеома человека. Наука 347 , 1260419 (2015).

    PubMed Google ученый

  • 18.

    Uhlen, M. et al. Атлас патологии транскриптома рака человека. Наука 357 , eaan2507 (2017).

    PubMed Google ученый

  • 19.

    Tan, W. C. C. et al. Обзор методов мультиплексной иммуногистохимии / иммунофлуоресценции в эпоху иммунотерапии рака. Cancer Commun. 40 , 135–153 (2020).

    Google ученый

  • 20.

    Боденмиллер, Б. Мультиплексная визуализация тканей на основе эпитопов для научных исследований и приложений здравоохранения. Cell Syst. 2 , 225–238 (2016).

    CAS PubMed Google ученый

  • 21.

    Radtke, A.J. et al. IBEX: универсальный подход к мультиплексной оптической визуализации для глубокого фенотипирования и пространственного анализа клеток в сложных тканях. Proc. Natl Acad. Sci. 117 , 33455–33465 (2020).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 22.

    Gut, G., Herrmann, M. D. & Pelkmans, L. Мультиплексные белковые карты связывают субклеточную организацию с клеточными состояниями. Наука 361 , eaar7042 (2018).

    PubMed Google ученый

  • 23.

    Лин Дж.-Р., Фаллахи-Сичани, М. и Соргер, П. К. Высокомультиплексная визуализация отдельных клеток с использованием высокопроизводительного метода циклической иммунофлуоресценции. Nat. Commun. 6 , 8390 (2015).

    CAS PubMed Google ученый

  • 24.

    Lin, J.-R. и другие. Высоко мультиплексная иммунофлуоресцентная визуализация тканей и опухолей человека с использованием t-CyCIF и обычных оптических микроскопов. eLife 7 , e31657 (2018).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 25.

    Gerdes, M. J. et al. Высоко мультиплексный одноклеточный анализ фиксированной формалином и залитой парафином раковой ткани. Proc. Natl Acad. Sci. США 110 , 11982–11987 (2013).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 26.

    Schubert, W. et al. Анализ топологии и функций протеома с помощью автоматизированной многомерной флуоресцентной микроскопии. Nat. Biotechnol. 24 , 1270–1278 (2006).

    CAS PubMed Google ученый

  • 27.

    Wählby, C., Erlandsson, F., Bengtsson, E. & Zetterberg, A. Последовательное иммунофлуоресцентное окрашивание и анализ изображений для обнаружения большого количества антигенов в ядрах отдельных клеток. Cytometry 47 , 32–41 (2002).

    PubMed Google ученый

  • 28.

    Зражевский, П. и Гао, X. Платформа квантовой визуализации для молекулярного профилирования отдельных клеток. Nat. Commun. 4 , 1–12 (2013).

    Google ученый

  • 29.

    Du, Z. et al. Квалификационные антитела для иммунного профилирования на основе изображений и мультиплексной визуализации тканей. Nat. Protoc. 14 , 2900–2930 (2019).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 30.

    Wang, Y. et al. Быстрое последовательное мультиплексирование in situ с визуализацией обмена ДНК в нейрональных клетках и тканях. Nano Lett. 17 , 6131–6139 (2017).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 31.

    Saka, S. K. et al. Immuno-SABER позволяет получать изображения белков в тканях с высокой степенью мультиплексирования и усиления. Nat. Biotechnol. 37 , 1080–1090 (2019).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 32.

    Schürch, C.M. et al. Скоординированные клеточные окрестности управляют противоопухолевым иммунитетом на инвазивном фронте колоректального рака. Ячейка 182 , 1341–1359.e1319 (2020).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 33.

    Neumann, E. K. et al. Высоко мультиплексная иммунофлуоресценция почек человека с использованием совместного обнаружения путем индексации. Kidney Int. https://doi.org/10.1016/j.kint.2021.08.033 (2021 г.).

  • 34.

    Lin, R. et al. Метод усиления иммуносигналов, основанный на гибридизации и цепной реакции. Nat. Методы 15 , 275–278 (2018).

    PubMed Google ученый

  • 35.

    Wang, Y. et al. Мультиплексная визуализация белков in situ с использованием антител со штрих-кодом ДНК с расширенными цепными реакциями гибридизации. Препринт на bioRxiv https://doi.org/10.1101/274456 (2020).

  • 36.

    Tsujikawa, T. et al. Количественная мультиплексная иммуногистохимия выявляет миелоидно-воспаленную опухоль-иммунную сложность, связанную с плохим прогнозом. Cell Rep. 19 , 203–217 (2017).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 37.

    Angelo, M. et al. Мультиплексная ионно-лучевая визуализация опухолей груди человека. Nat. Med. 20 , 436–442 (2014).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 38.

    Giesen, C. et al. Мультиплексная визуализация опухолевых тканей с субклеточным разрешением методом массовой цитометрии. Nat. Методы 11 , 417–422 (2014).

    CAS PubMed Google ученый

  • 39.

    Chang, Q. et al. Визуализирующая массовая цитометрия. Cytom. Часть A 91 , 160–169 (2017).

    Google ученый

  • 40.

    Wei, L. et al. Супермультиплексная вибрационная визуализация. Природа 544 , 465–470 (2017).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 41.

    Wong, H. S. et al. Локальная регуляторная цепь обратной связи с Т-клетками поддерживает иммунный гомеостаз за счет сокращения самоактивированных Т-клеток. Cell , 3981–3997 (2021).

  • 42.

    Chung, K. et al. Структурный и молекулярный опрос интактных биологических систем. Природа 497 , 332–337 (2013).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 43.

    Ли, В., Жермен, Р. Н. и Гернер, М. Ю. Мультиплекс, количественный клеточный анализ в больших объемах тканей с помощью трехмерной микроскопии с улучшенным просветлением (Ce3D). Proc. Natl Acad. Sci. США 114 , E7321 – E7330 (2017).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 44.

    Murray, E. et al. Простая масштабируемая протеомная визуализация для высокоразмерного профилирования неповрежденных систем. Cell 163 , 1500–1514 (2015).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 45.

    Ku, T. et al. Мультиплексная и масштабируемая визуализация с высоким разрешением трехмерной локализации белка в тканях регулируемого размера. Nat. Biotechnol. 34 , 973–981 (2016).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 46.

    Парк, Ю.-Г. и другие. Защита физико-химических свойств тканей с помощью полифункциональных сшивающих агентов. Nat. Biotechnol. 37 , 73–83 (2019).

    CAS Google ученый

  • 47.

    Tillberg, P. W. et al. Увеличивающая микроскопия удерживания белка клеток и тканей, меченных с использованием стандартных флуоресцентных белков и антител. Nat. Biotechnol. 34 , 987–992 (2016).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 48.

    Zhang, J. et al. Оценка эффективности нацеливания на опухоль и внутриопухолевой гетерогенности противоопухолевых препаратов с использованием количественной масс-спектрометрической визуализации. Тераностика 10 , 2621–2630 (2020).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 49.

    Yun, D.H. et al. Сверхбыстрое иммуноокрашивание тканей на уровне органов для масштабируемого протеомного фенотипирования. Препринт на bioRxiv https://doi.org/10.1101/660373 (2019).

  • 50.

    Kim, S.-Y. и другие. Стохастический электротранспорт избирательно усиливает транспорт высокомобильных молекул. Proc. Natl Acad. Sci. США 112 , E6274 – E6283 (2015).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 51.

    Davis, A. S. et al. Характеристика и уменьшение аутофлуоресценции в фиксированной формалином и залитой парафином респираторной ткани человека. J. Гистохимия Цитохимия 62 , 405–423 (2014).

    CAS Google ученый

  • 52.

    Merritt, C. R. et al. Мультиплексное цифровое пространственное профилирование белков и РНК в фиксированной ткани. Nat. Biotechnol. 38 , 586–599 (2020).

    CAS PubMed Google ученый

  • 53.

    Shi, S.-R., Shi, Y. & Taylor, C.R. Иммуногистохимия поиска антигена: обзор и будущие перспективы в исследованиях и диагностике на протяжении двух десятилетий. J. Histochem. Cytochem. 59 , 13–32 (2011).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 54.

    Ши, С.-Р. и другие. Оценка ценности замороженных срезов ткани, используемых в качестве «золотого стандарта» для иммуногистохимии. г. J. Clin.Патол. 129 , 358–366 (2008).

    CAS PubMed Google ученый

  • 55.

    Neumann, E. K., Comi, T. J., Rubakhin, S. S. & Sweedler, J. V. Гетерогенность липидов между астроцитами и нейронами, выявленная одноклеточным MALDI-MS в сочетании с иммуноцитохимической классификацией. Angew. Chem. Int. Эд. 58 , 5910–5914 (2019).

    CAS Google ученый

  • 56.

    Radtke, A. J. et al. IBEX: метод итеративной иммуномаркировки и химического отбеливания для получения изображений различных тканей с высоким содержанием. Nat. Protoc. https://doi.org/10.1038/s41596-021-00644-9 (2021 г.).

  • 57.

    Муззи Д. и Ауденаарден А. В. Количественная покадровая флуоресцентная микроскопия в отдельных клетках. Annu. Rev. Cell Dev. Биол. 25 , 301–327 (2009).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 58.

    Санти, П. А. Световая флуоресцентная микроскопия: обзор. J. Histochem. Cytochem. 59 , 129–138 (2011).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 59.

    Леунг Б. О. и Чжоу К. С. Обзор флуоресцентной микроскопии сверхвысокого разрешения для биологии. Заявл. Spectrosc. 65 , 967–980 (2011).

    CAS PubMed Google ученый

  • 60.

    Шакья Р., Нгуен Т. Х., Уотерхаус Н. и Ханна Р. Анализ иммунного контекста в иммуноонкологии: приложения и проблемы мультиплексной флуоресцентной иммуногистохимии. Clin. Пер. Иммунол. 9 , e1183 (2020).

    Google ученый

  • 61.

    Самусик, Н., Гуд, З., Спитцер, М. Х., Дэвис, К. Л. и Нолан, Г. П. Автоматическое картирование пространства фенотипов с помощью одноклеточных данных. Nat. Методы 13 , 493–496 (2016).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 62.

    Brummelman, J. et al. Разработка, применение и компьютерный анализ многомерных флуоресцентных панелей антител для одноклеточной проточной цитометрии. Nat. Protoc. 14 , 1946–1969 (2019).

    CAS PubMed Google ученый

  • 63.

    Szabó, Á. и другие. Влияние конъюгации флуорофора на аффинность антител и фотофизические свойства красителей. Biophys. J. 114 , 688–700 (2018).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 64.

    Adusumalli, S. R. et al. Хемоселективная и сайт-селективная модификация лизина, направленная на лизин, делает возможным одноцентровое мечение нативных белков. Angew. Chem. Int. Эд. 59 , 10332–10336 (2020).

    CAS Google ученый

  • 65.

    Matos, M. J. et al. Химио- и региоселективная модификация лизина нативных белков. JACS 140 , 4004–4017 (2018).

    CAS Google ученый

  • 66.

    Кремерс, Г. А. О., Розье, Б. Дж. Х. М., Риера Брильяс, Р., Альбертацци, Л. и де Гриф, Т. Ф. А. Эффективная мелкомасштабная конъюгация ДНК с первичными антителами для мультиплексного клеточного нацеливания. Bioconjug Chem. 30 , 2384–2392 (2019).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 67.

    Sograte-Idrissi, S. et al. Обход обычных артефактов маркировки с помощью вторичных нанотел. Наноразмер 12 , 10226–10239 (2020).

    CAS PubMed Google ученый

  • 68.

    Rajagopalan, A. et al. SeqStain — это эффективный метод мультиплексного пространственно-экономического профилирования тканей человека и мыши. Cell Rep. Methods 1 , 100006 (2021).

    PubMed Central Google ученый

  • 69.

    Brun, M.-P. & Gauzy-Lazo, L. в конъюгатах антитело-лекарство 173–187 (Springer, 2013).

  • 70.

    Datta-Mannan, A. et al. На свойства конъюгатов антитело-лекарственное средство, конъюгированных с цистеином, влияет подкласс IgG. AAPS J. 20 , 103 (2018).

    PubMed Google ученый

  • 71.

    Uhlen, M. et al. Предложение по валидации антител. Nat. Методы 13 , 823–827 (2016).

    CAS PubMed Google ученый

  • 72.

    Bordeaux, J. et al. Проверка антител. BioTechniques 48 , 197–209 (2010).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 73.

    Pagès, F. et al.Международная проверка консенсуса Immunoscore для классификации рака толстой кишки: исследование прогноза и точности. Ланцет 391 , 2128–2139 (2018).

    PubMed Google ученый

  • 74.

    Stadler, C. et al. Систематическая проверка связывания антител и субклеточной локализации белков с использованием миРНК и конфокальной микроскопии. J. Proteom. 75 , 2236–2251 (2012).

    CAS Google ученый

  • 75.

    Джулиано, К. Дж., Лин, А., Гириш, В. и Шельцер, Дж. М. Создание нокаутных клонов на основе отдельных клеток в клетках млекопитающих с помощью CRISPR / Cas9. Curr. Protoc. Мол. Биол. 128 , e100 (2019).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 76.

    Хьюитт, С. М., Баскин, Д. Г., Фреверт, К. В., Шталь, В. Л. и Роза-Молинар, Е. Контроли для иммуногистохимии: стандарты практики Гистохимического общества для валидации иммуногистохимических анализов. J. Histochem. Cytochem. 62 , 693–697 (2014).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 77.

    Густавсон, М. Д., Римм, Д. Л. и Доллед-Филхарт, М. Микроматрицы тканей: преодоление разрыва между исследованиями и клиническим применением. Персонализированная мед. 10 , 441–451 (2013).

    CAS Google ученый

  • 78.

    Кэмп, Р. Л., Чанг, Г. Г. и Римм, Д. Л. Автоматизированная субклеточная локализация и количественная оценка экспрессии белка в тканевых микрочипах. Nat. Med. 8 , 1323–1328 (2002).

    CAS PubMed Google ученый

  • 79.

    Martinez-Morilla, S. et al. Обнаружение биомаркеров у пациентов с меланомой, леченной иммунотерапией, с помощью визуализирующей массовой цитометрии. Clin. Cancer Res. 27 , 1987–1996 (2021).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 80.

    Бейкер, М. 1500 ученых поднимают крышку над воспроизводимостью. Природа 533 , 452 (2016).

    CAS PubMed Google ученый

  • 81.

    Джарвис, М. Ф. и Уильямс, М. Невоспроизводимость в доклинических биомедицинских исследованиях: восприятие, неопределенности и пробелы в знаниях. Trends Pharmacol. Sci. 37 , 290–302 (2016).

    CAS PubMed Google ученый

  • 82.

    Snyder, M. P. et al. Человеческое тело в клеточном разрешении: программа NIH Human Biomolecular Atlas Program. Природа 574 , 187–192 (2019).

    Google ученый

  • 83.

    Rozenblatt-Rosen, O. et al. Сеть атласа опухолей человека: отображение переходов опухоли в пространстве и времени с разрешением одной клетки. Ячейка 181 , 236–249 (2020).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 84.

    Clark, K. et al. Архив визуализации рака (TCIA): поддержка и управление хранилищем общедоступной информации. J. Digit. Изображения 26 , 1045–1057 (2013).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 85.

    Уильямс, Э.и другие. Image Data Resource: платформа для интеграции и публикации данных биоизображений. Nat. Методы 14 , 775–781 (2017).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 86.

    Шнайдер, К. А., Расбанд, В. С. и Элисейри, К. В. NIH Image to ImageJ: 25 лет анализа изображений. Nat. Методы 9 , 671–675 (2012).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 87.

    Rashid, R. et al. Сильно мультиплексированные иммунофлуоресцентные изображения и одноклеточные данные иммунных маркеров при раке миндалин и легких. Sci. Данные 6 , 323 (2019).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 88.

    Чех, Э., Аксой, Б. А., Аксой, П. и Хаммербахер, Дж. Cytokit: набор инструментов для анализа отдельных клеток для получения изображений с помощью флуоресцентной микроскопии большого размера. BMC Bioinf. 20 , 448 (2019).

    Google ученый

  • 89.

    McQuin, C. et al. CellProfiler 3.0: обработка изображений нового поколения для биологии. PLoS Biol. 16 , e2005970 (2018).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 90.

    Stringer, C., Wang, T., Michaelos, M. & Pachitariu, M. Cellpose: универсальный алгоритм для клеточной сегментации. Nat. Методы 18 , 100–106 (2021).

    CAS PubMed Google ученый

  • 91.

    Bankhead, P. et al. QuPath: программное обеспечение с открытым исходным кодом для анализа изображений цифровой патологии. Sci. Отчетность 7 , 16878 (2017).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 92.

    Bannon, D. et al. DeepCell Kiosk: масштабирование анализа сотовых изображений на основе глубокого обучения с помощью Kubernetes. Nat.Методы 18 , 43–45 (2021).

    CAS PubMed Google ученый

  • 93.

    Зоммер, К., Стреле, К., Кете, У. и Хампрехт, Ф.А. в 2011 IEEE Международный симпозиум по биомедицинской визуализации: от нано до макро . 230–233 (IEEE, 2011).

  • 94.

    Schapiro, D. et al. histoCAT: анализ клеточных фенотипов и взаимодействий в данных цитометрии мультиплексных изображений. Nat.Методы 14 , 873–876 (2017).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 95.

    Schapiro, D. et al. MCMICRO: масштабируемый модульный конвейер обработки изображений для мультиплексной визуализации тканей. Препринт на bioRxiv https://doi.org/10.1101/2021.03.15.435473 (2021 г.).

  • 96.

    Palla, G. et al. Squidpy: масштабируемая платформа для пространственного анализа отдельных ячеек. Препринт на bioRxiv https: // doi.org / 10.1101 / 2021.02.19.431994 (2021).

  • 97.

    Stoltzfus, C.R. et al. CytoMAP: набор инструментов для пространственного анализа выявляет особенности организации миелоидных клеток в лимфоидных тканях. Сотовый отдел 31 , 107523 (2020).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 98.

    Paintdakhi, A. et al. Oufti: интегрированный пакет программного обеспечения для высокоточного и высокопроизводительного количественного микроскопического анализа. Мол. Microbiol. 99 , 767–777 (2016).

    CAS PubMed Google ученый

  • 99.

    Sage, D. et al. DeconvolutionLab2: программное обеспечение с открытым исходным кодом для микроскопии деконволюции. Методы 115 , 28–41 (2017).

    CAS PubMed Google ученый

  • 100.

    Куликов В.В. и др. DoGNet: глубокая архитектура для обнаружения синапсов в мультиплексированных флуоресцентных изображениях. PLoS Comput. Биол. 15 , e1007012 (2019).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 101.

    Risom, T. et al. Переход к инвазивному раку груди связан с прогрессирующими изменениями структуры и состава стромы опухоли. Препринт на bioRxiv https://doi.org/10.1101/2021.01.05.425362 (2021).

  • 102.

    Kramer, B. A. & Pelkmans, L. Состояние клетки определяет мультимодальный сигнальный ответ отдельных клеток.Препринт на bioRxiv https://doi.org/10.1101/2019.12.18.880930 (2019).

  • 103.

    Ю., Х., Янг, Ю.-П., Дикичи, Э., Део, С. К. и Даунерт, С. Помимо антител в качестве партнеров по связыванию: роль миметиков антител в биоанализе. Annu Rev. Anal. Chem. 10 , 293–320 (2017).

    CAS Google ученый

  • 104.

    Berry, S. et al. Анализ мультиспектральных изображений с помощью платформы AstroPath сообщает об эффективности блокады PD-1. Наука 372 , eaba2609 (2021).

    CAS PubMed Google ученый

  • 105.

    Wilkinson, M. D. et al. Руководящие принципы FAIR для управления научными данными и их рационального использования. Sci. Данные 3 , 160018 (2016).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 106.

    Schapiro, D. et al. MITI Minimum Information Guidelines для сильно мультиплексированных изображений тканей.Препринт на https://arxiv.org/abs/2108.09499 (2021 г.).

  • 107.

    Moore, J. et al. OME-NGFF: стратегии масштабируемого формата для совместимых данных биоизображения. Препринт на bioRxiv https://doi.org/10.1101/2021.03.31.437929 (2021).

  • 108.

    Nirmal, A.J. et al. Пространственный ландшафт прогрессирования и иммуноредактирования в первичной меланоме при разрешении одной клетки. Препринт на bioRxiv https://doi.org/10.1101/2021.05.23.445310 (2021 г.).

  • 109.

    Liu, Y. et al. Многокомпонентное секвенирование с высоким пространственным разрешением с помощью детерминированного штрих-кодирования в ткани. Cell 183 , 1665–1681 (2020).

    CAS PubMed Google ученый

  • Что такое праймер и почему он важен? Наш-Живопись

    Если вы читали достаточно блогов о живописи или разговаривали с профессиональными местными художниками об их ремесле, слово «грунтовка», вероятно, приходило в голову хотя бы раз.Но что такое праймер? Почему это важно? И нужно ли праймить каждый раз? Давайте разберемся.

    Грунтовка по грунтовке

    Проще говоря, грунтовка — это начальное покрытие, которое наносится на поверхность перед окраской. Этот материал «грунтует» окрашиваемую поверхность, обеспечивая буфер между голой поверхностью и краской. Грунтовки обычно состоят из трех частей: синтетической смолы (около), растворителя (обычно) и добавки (всего около 2-5% смеси).Грунтовка в основном белая, но есть и тонированные.

    Грунтовка и краска

    Главный источник путаницы вокруг грунтовки заключается в том, чем она отличается от краски. В конце концов, оба продукта выпускаются в банках одинаковой формы и предназначены для покрытия определенной поверхности. Но хотя краска и грунтовка во многом схожи, они различаются по химическому составу. С точки зрения непрофессионала, краски на основе пигментов, а грунтовки — на основе смол. Смолы действительно проникают в поверхность, заполняя ее поры.Поэтому грунтовка действует как герметик. Пигменты в краске не обладают этим качеством, но вместо этого придают цвет и повышают стойкость.

    Почему праймер вообще имеет значение?

    Итак, мы кратко обсудили, что такое грунтовка и чем она отличается от краски. Но мы до сих пор не объяснили, почему компании, занимающиеся покраской коммерческих и жилых интерьеров, считают это настолько важным. Конечно, приведенная выше информация уже может дать вам представление.

    Как упоминалось ранее, грунтовка действует как связующее и герметизирующее средство.Впитываясь в поверхность, грунтовка создает барьер, который облегчает прилипание краски. Без этого начального грунтовочного слоя часть самой краски впиталась бы в поверхность. Это может повредить поверхность и ухудшить качество и внешний вид окраски. Таким образом, грунтовка имеет три преимущества: она защищает основную поверхность, помогает краске прилипать и увеличивает стойкость краски.

    Подрядчики по внутренней и внешней окраске могут также использовать различные типы грунтовки на разных типах поверхностей для максимальной защиты и адгезии краски.

    Всегда ли необходима заливка?

    Короче говоря, грунтовка не всегда обязательна. В некоторых случаях этот шаг необязательно требуется. Например, если вы подкрашиваете ранее окрашенную поверхность, которая находится в хорошем состоянии, вы или ваши местные художники по интерьеру должны просто очистить и закрасить ее. В противном случае грунтование — важная мера для достижения наилучших результатов.

    Как правило, перед покраской всегда следует грунтовать:

    • Новая, никогда ранее не окрашенная поверхность
    • Пористая поверхность
    • Изношенная поверхность
    • Поверх другого цвета (особенно более темного цвета )
    • С гладкой поверхностью поверх более глянцевой (чтобы не просвечивал блеск)

    Кроме того, есть и другие случаи, когда грунтовка является хорошей идеей.В конце концов, если сомневаетесь, разбейте грунтовку.

    Optimal Prime

    Тот факт, что вы не видите праймер, не означает, что он не является ценным игроком. Действительно, практически за каждой качественной покраской стоит качественный слой грунтовки. И теперь вы знаете почему. Тем не менее, вам может быть сложно понять, сколько праймера вам нужно, какой тип и как его правильно нанести. В таком случае обратитесь за помощью к надежной и опытной малярной компании в Нэшвилле. В Nash Painting мы всегда на высоте.Чтобы узнать больше о нас, наших услугах и наших ценностях, позвоните нам сегодня по телефону (615) 829-6858!

    Установка

    ПЦР — Шесть важнейших компонентов, которые следует учитывать | Thermo Fisher Scientific

    Успех ПЦР зависит от ряда факторов, при этом компоненты реакции играют решающую роль в амплификации. Ключевые моменты при настройке реакций включают следующее, и они подробно описаны на этой странице:

    Рекомендуемое видео: Основы ПЦР

    ?

    Матрицей ПЦР для репликации может быть любой источник ДНК, такой как геномная ДНК (гДНК), комплементарная ДНК (кДНК) и плазмидная ДНК.Тем не менее, состав или сложность ДНК способствует оптимальному количеству вводимых данных для амплификации ПЦР. Например, достаточно 0,1–1 нг плазмидной ДНК, в то время как 5–50 нг гДНК могут потребоваться в качестве начального количества для 50 мкл ПЦР. Оптимальные количества матрицы также могут варьироваться в зависимости от типа используемой ДНК-полимеразы; ДНК-полимераза, сконструированная так, чтобы иметь более высокую чувствительность из-за сродства к матрице, потребовала бы меньшего количества вводимой ДНК. Оптимизация ввода ДНК важна, потому что более высокие количества увеличивают риск неспецифической амплификации, тогда как меньшие количества снижают выход (, рис. 1, ).

    Рисунок 1. Сравнение результатов ПЦР с плазмидой и матрицей человеческой гДНК. Эту же ДНК-полимеразу использовали для амплификации целевой последовательности размером 2 т.п.н. из различных количеств входящей ДНК в рекомендуемых условиях.

    Иногда протоколы ПЦР могут требовать ввода ДНК с точки зрения количества копий, особенно для гДНК. Расчет числа копий зависит от количества присутствующих молекул в молях входящей ДНК. Используя постоянную Авогадро (L) и молярную массу, число копий можно рассчитать следующим образом:

    Число копий = L x число молей = L x (общая масса / молярная масса)

    Молярная масса конкретной цепи ДНК равна определяется его размером или общим количеством баз (т.е., сочетание его длины и одноцепочечной или двухцепочечной природы). Для удобства и простоты доступен онлайн-инструмент для вычисления количества копий по массе входной ДНК.

    Теоретически одной копии ДНК или одной клетки достаточно для амплификации с помощью ПЦР в идеальных условиях. Однако на практике эффективность амплификации определенного количества матрицы сильно зависит от компонентов и параметров реакции, а также от чувствительности ДНК-полимеразы.Кроме того, выбранная ДНК-полимераза должна быть сертифицирована на контролируемый низкий уровень остаточной ДНК, чтобы свести к минимуму ложные сигналы при ПЦР.

    Помимо гДНК, кДНК и плазмидной ДНК, также можно повторно амплифицировать продукты ПЦР для получения более высокого выхода мишени. Хотя неочищенные продукты можно непосредственно использовать в качестве матрицы, переносимые компоненты реакции, такие как праймеры, dNTP, соли и побочные продукты, могут отрицательно влиять на амплификацию. Чтобы избежать такого ингибирования, общая рекомендация — разбавить реакционную смесь водой до следующего раунда ПЦР.Для достижения наилучших результатов перед повторной амплификацией ампликоны ПЦР необходимо очистить. С помощью оптимизированных наборов для очистки ПЦР процедура очистки с помощью ПЦР может быть выполнена всего за 5 минут.

    Как настроить реакцию ПЦР

    ДНК-полимеразы играют важную роль в репликации целевой ДНК. Taq ДНК-полимераза, пожалуй, самый известный фермент, используемый для ПЦР, и ее открытие произвело революцию в ПЦР. Taq ДНК-полимераза имеет относительно высокую термостабильность с периодом полураспада примерно 40 минут при 95 ° C [1].Он включает нуклеотиды со скоростью около 60 оснований в секунду при 70 ° C и может увеличивать длину около 5 т.п.н., поэтому он подходит для стандартной ПЦР без особых требований. В настоящее время были разработаны новые поколения ДНК-полимераз для значительного повышения эффективности ПЦР.

    В типичной реакции объемом 50 мкл 1-2 единиц ДНК-полимеразы достаточно для амплификации целевой ДНК. Однако может потребоваться корректировка количества фермента с помощью сложных шаблонов. Например, когда в образце ДНК присутствуют ингибиторы, увеличение количества ДНК-полимеразы может улучшить результаты ПЦР.Однако неспецифические продукты ПЦР могут появляться при более высоких концентрациях фермента (, рис. 2, ).

    Для более специализированных приложений, таких как клонирование ПЦР, длинная амплификация и ПЦР с богатым анализом ГХ, предпочтительны ДНК-полимеразы с более высокими характеристиками. Эти ферменты способны генерировать продукты ПЦР с меньшим количеством ошибок из длинных матриц за более короткое время с лучшими выходами и более высокой устойчивостью к ингибиторам (узнайте больше о характеристиках ДНК-полимеразы).


    Рисунок 2.Повышенное количество ДНК-полимеразы может помочь с результатами ПЦР, но может производить неспецифические ампликоны.
    Верхняя полоса представляет желаемый ампликон для ПЦР.

    Праймеры для ПЦР представляют собой синтетические ДНК-олигонуклеотиды примерно из 15–30 оснований. Праймеры для ПЦР предназначены для связывания (посредством комплементарности последовательностей) с последовательностями, фланкирующими интересующую область в матричной ДНК. Во время ПЦР ДНК-полимераза удлиняет праймеры с их 3′-концов. По существу, сайты связывания праймеров должны быть уникальными в непосредственной близости от мишени с минимальной гомологией с другими последовательностями входящей ДНК, чтобы гарантировать специфическую амплификацию намеченной мишени.

    В дополнение к гомологии последовательностей, праймеры должны быть тщательно разработаны другими способами для специфичности амплификации ПЦР. Во-первых, последовательности праймеров должны иметь температуру плавления (T m ) в диапазоне 55–70 ° C, при этом T m s двух праймеров в пределах 5 ° C друг от друга. Не менее важно, что праймеры должны разрабатываться без комплементарности между праймерами (особенно на их 3′-концах), что способствует их отжигу (т.е., вторичные структуры) или прямые повторы, которые могут создавать несовершенное совмещение с целевой областью шаблона.

    Советы по созданию праймеров для ПЦР

    Кроме того, содержание GC в праймере в идеале должно составлять 40–60% с равномерным распределением оснований C и G, чтобы избежать ошибочного засева. Точно так же на 3′-концах праймеров должно присутствовать не более трех оснований G или C, чтобы минимизировать неспецифическое праймирование. С другой стороны, один нуклеотид C или G на 3′-конце праймера может способствовать выгодному закреплению и удлинению праймера (, таблица 1, ).Для удобства и простоты доступен ряд онлайн-инструментов для биоинформатического проектирования и выбора оптимальных последовательностей праймеров с определенными параметрами.

    Таблица 1. Общие рекомендации по созданию праймеров для ПЦР.
    Доза Нельзя
    • Длина 15–30 н.
    • T м 55–70 ° C (в пределах 5 ° C, для двух грунтовок)
    • 40–60% GC (с равномерным распределением)
    • Один C или G на 3′-конце
    • Вторичная структура (комплементарность)
    • Прямые повторы
    • Более трех G или C на 3′-конце

    Праймеры с длинными последовательностями (например,g.,> 50 нуклеотидов) и / или модифицированные основания часто необходимо очищать для удаления неполноразмерных продуктов и неконъюгированных нуклеотидов. Очистка праймера рекомендуется для таких применений, как клонирование и мутагенез, где целостность последовательности и длины имеет решающее значение для успеха эксперимента.

    При конструировании праймеров для клонирования ПЦР нематричные последовательности, такие как сайты рестрикции, последовательности рекомбинации и сайты связывания промоторов, могут быть введены на 5′-концы в виде удлинений. Эти последовательности расширения должны быть тщательно разработаны для минимального воздействия на амплификацию ПЦР и последующие приложения (узнайте больше о клонировании ПЦР).

    При настройке ПЦР к реакции добавляют праймеры в диапазоне 0,1–1 мкМ. Для праймеров с вырожденными основаниями или праймеров, используемых в длинной ПЦР, концентрация праймеров 0,3–1 мкМ часто является благоприятной. Общая рекомендация — начинать со стандартных концентраций и при необходимости корректировать. Более высокие концентрации праймеров часто способствуют ошибочному зачатию и неспецифической амплификации. С другой стороны, низкие концентрации праймеров могут привести к низкой амплификации или отсутствию амплификации желаемой мишени (, фиг. 3, ).

    Рисунок 3. ПЦР-амплификация человеческой гДНК с различными концентрациями праймеров. В этих экспериментах амплифицировали фрагмент размером 0,7 т.п.н. с высоким содержанием GC. Обратите внимание на накопление неспецифических продуктов и димеров праймеров с высокими концентрациями праймеров.

    Дезоксинуклеозидтрифосфаты (dNTPs)

    dNTPs состоят из четырех основных нуклеотидов — dATP, dCTP, dGTP и dTTP — как строительных блоков новых цепей ДНК. Эти четыре нуклеотида обычно добавляют в реакцию ПЦР в эквимолярных количествах для оптимального включения оснований.Однако в определенных ситуациях, таких как случайный мутагенез с помощью ПЦР, преднамеренно вводятся несбалансированные концентрации дНТФ, чтобы способствовать более высокой степени неправильного включения ДНК-полимеразой, не считывающей корректирующую проверку.

    В обычных приложениях ПЦР рекомендуемая конечная концентрация каждого dNTP обычно составляет 0,2 мМ. Более высокие концентрации могут помочь в некоторых случаях, особенно в присутствии высоких уровней Mg 2+ , поскольку Mg 2+ связывается с dNTP и снижает их доступность для включения.Однако дНТФ, превышающие оптимальные концентрации, могут ингибировать ПЦР. Для эффективного включения ДНК-полимеразой свободные дНТФ должны присутствовать в реакции в концентрации не менее 0,010–0,015 мМ (по их оценкам K m ) ( Рисунок 4 ). При использовании ДНК-полимераз без корректуры точность считывания можно повысить за счет снижения концентрации dNTP (0,01–0,05 мМ), а также пропорционального уменьшения Mg 2+ .


    Рисунок 4.ПЦР-амплификация лямбда-ДНК размером 1 т.п.н. с различными концентрациями дНТФ.
    Конечная концентрация MgCl 2 в каждой реакции составляла 4 мМ.

    В некоторых приложениях dNTP могут включать специальные нуклеотиды. Примером является замена dTTP на дезоксиуридинтрифосфат (dUTP) в сочетании с предварительной обработкой урацил-ДНК-гликозилазой (UDG) в качестве стратегии предотвращения переносимого загрязнения ПЦР [2]. UDG — это фермент репарации ДНК, который расщепляет урацил-содержащие цепи ДНК.Замена dTTP на dUTP приводит к образованию продуктов ПЦР, содержащих урацил. Инкубация образцов реакции с UDG перед началом ПЦР удаляет загрязняющие переносимые ампликоны ПЦР с урацилом, тем самым предотвращая ложноположительные результаты от переносимых продуктов ПЦР (, фиг. 5, ).

    Рис. 5. Обработка УДГ для предотвращения загрязнения ампликонов ПЦР переносом. UDG расщепляет основания урацила (красные столбики), присутствующие во фрагментах ДНК. Абазовые цепи ДНК склонны к деградации в условиях ПЦР и не амплифицируются в последующей ПЦР.

    Есть несколько предостережений, которые следует учитывать при использовании dUTP в ПЦР. Во-первых, замена dUTP может снизить эффективность и чувствительность ПЦР. Эту проблему можно решить, используя оптимальное соотношение dTTP к dUTP, так чтобы каждая молекула продукта ПЦР несла достаточное количество оснований урацила для эффективной обработки UDG без значительного влияния на эффективность ПЦР. Во-вторых, хотя ДНК-полимераза Taq включает dUTP во время синтеза ДНК, проверочные ДНК-полимеразы, такие как Pfu , не могут переносить dUTP, если они не были специально модифицированы для включения урацила.Это свойство связано с наличием урацил-связывающего кармана в ДНК-полимеразах на основе Archaea в качестве механизма репарации ДНК [3,4].

    Аналогичным образом, модифицированные dNTP, такие как аминоаллил-dUTP, флуоресцеин-12-dUTP, 5-бром-dUTP и биотин-11-dUTP, обычно используются для включения меток для последующих экспериментов. Подобно dUTP, ДНК-полимераза должна быть способна включать модифицированные dNTP для успешной ПЦР.

    Ион магния (Mg 2+ ) действует как кофактор активности ДНК-полимераз, обеспечивая включение dNTP во время полимеризации.Ионы магния в активном центре фермента катализируют образование фосфодиэфирной связи между 3′-ОН праймера и фосфатной группой dNTP (, фиг. 6, ). Кроме того, Mg 2+ облегчает образование комплекса между праймерами и матрицами ДНК за счет стабилизации отрицательных зарядов на их фосфатных каркасах ( Рисунок 8, ) [5].


    Рис. 6. Функция иона магния в активном центре ДНК-полимеразы.
    Mg 2+ помогает координировать взаимодействие между 3′-OH праймера и фосфатной группой входящего dNTP в полимеризации ДНК.

    Ионы Mg 2+ обычно доставляются в виде раствора MgCl 2 в смесь для ПЦР. Однако некоторые полимеразы, такие как ДНК-полимераза Pfu , предпочитают MgSO 4 , поскольку сульфат помогает обеспечить более надежные и воспроизводимые характеристики при определенных обстоятельствах. Концентрация магния часто нуждается в оптимизации, чтобы максимизировать выход ПЦР при сохранении специфичности из-за его связывания с dNTP, праймерами, матрицами ДНК и EDTA (если присутствует).

    Типичная конечная концентрация Mg 2+ в ПЦР находится в диапазоне 1–4 мМ, с 0.Для оптимизации рекомендуется шаг титрования 5 мМ. Низкие концентрации Mg 2+ приводят к небольшому количеству продукта ПЦР или его отсутствию из-за пониженной активности полимеразы. С другой стороны, высокие концентрации Mg 2+ часто приводят к образованию неспецифических продуктов ПЦР из-за повышенной стабильности комплексов праймер-матрица, а также из-за увеличения ошибок репликации из-за неправильного включения dNTP (, фиг. 7, ).


    Рисунок 7. ПЦР-амплификация с различными концентрациями MgCl 2 .
    Верхние полосы представляют собой желаемый фрагмент 2,8 т.п.н., амплифицированный из человеческой гДНК.

    ПЦР проводят в буфере, который обеспечивает подходящую химическую среду для активности ДНК-полимеразы. PH буфера обычно составляет от 8,0 до 9,5 и часто стабилизируется трис-HCl.

    Для ДНК-полимеразы Taq обычным компонентом буфера является ион калия (K + ) из KCl, который способствует отжигу праймера. Иногда сульфат аммония (NH 4 ) 2 SO 4 может заменить KCl в буфере.Ион аммония (NH 4 + ) оказывает дестабилизирующее действие, особенно на слабые водородные связи между несовпадающими парами оснований праймер-матрица, тем самым повышая специфичность ( Фиг.8, ). Обратите внимание, что ДНК-полимеразы часто поставляются с буферами для ПЦР, оптимизированными для высокой активности ферментов; поэтому рекомендуется использовать предоставленный буфер для достижения оптимальных результатов ПЦР.

    Рис. 8. Влияние буферных ионов на образование дуплекса ДНК. Ионы калия и магния (K + и Mg 2+ ) связываются с фосфатными группами (P ) на основной цепи ДНК и стабилизируют образование дуплекса, в то время как ион аммония (NH 4 + ) может взаимодействуют с водородными связями между основаниями (N) и дестабилизируют образование дуплекса.

    Поскольку Mg 2+ обладает стабилизирующим действием, аналогичным K + , рекомендуемые концентрации MgCl 2 обычно ниже при использовании буфера KCl (1,5 ± 0,25 мМ), но выше при использовании (NH 4 ) 2 SO 4 буфер (2,0 ± 0,5 мМ). Благодаря антагонистическим эффектам NH 4 + и Mg 2+ , буферы с (NH 4 ) 2 SO 4 предлагают более высокую специфичность праймера в широком диапазоне концентраций Mg 2+ ( Рисунок 9 ).Важно следовать рекомендациям по использованию буфера поставщика фермента, поскольку оптимальный буфер для ПЦР зависит от используемой ДНК-полимеразы.

    Рис. 9. Результаты ПЦР для различных концентраций MgCl 2 в двух разных типах буфера, демонстрирующие важность выбора буфера для специфичности ПЦР. Фрагмент 0,95 т.п.н. амплифицировали из человеческой гДНК с ДНК-полимеразой Taq в этих реакциях.

    В определенных сценариях в буфер могут быть включены химические добавки или сорастворители для повышения специфичности амплификации за счет снижения ошибочного старта и повышения эффективности амплификации за счет удаления вторичных структур (, таблица 2, ).Кроме того, некоторые ДНК-полимеразы поставляются со специально разработанными усилителями, оптимизированными для ДНК-полимеразы и буфера для ПЦР. Эти реагенты обычно используются с трудными образцами, такими как шаблоны, обогащенные ГХ. Обратите внимание, что использование химических добавок или сорастворителей может повлиять на отжиг праймера, денатурацию матрицы, связывание Mg 2+ и активность ферментов. Кроме того, они могут мешать определенным последующим применениям — например, неионогенным детергентам в экспериментах с микрочипами. Следовательно, важно знать состав буфера для успешной ПЦР и последующего использования.

    Таблица 2. Общие добавки или сорастворители, используемые в качестве усилителей ПЦР, и их рекомендуемые конечные концентрации [6].

    использованная литература

    Учебник по графическому дизайну, часть 3: Основы композиции

    В первых двух разделах этого учебника мы рассмотрели основные элементы дизайна и основные принципы дизайна. В этом разделе мы рассмотрим основные принципы композиции .

    Существует множество различных теорий композиции, с которыми вам следует ознакомиться.Поскольку это всего лишь учебник, дается краткий обзор наиболее распространенных и важных теорий. Вы захотите изучить каждый из них более глубоко, прежде чем применять их, поэтому мы включили для каждого дополнительные ресурсы.

    Одноместный визуальный

    Единый визуальный метод композиции — это когда единый, как правило, яркий визуальный образ используется в качестве основы дизайна. Иногда это можно увидеть на одностраничных веб-сайтах или, чаще, в полиграфическом дизайне.

    Единый визуальный узор — это самая легкая композиция для успешного достижения.Выберите сильный образ, и пусть он сделает за вас большую часть работы. Главное здесь — убедиться, что другие элементы вашего дизайна (в большинстве случаев типографика является другим важным элементом дизайна) поддерживают и усиливают основной визуальный элемент, а не пытаются конкурировать с ним.

    Сайты, подобные тем, что созданы на About.me, являются отличным примером шаблона моновизуальной композиции.

    Веб-сайт Джейми Брауна имеет похожий единый визуальный дизайн:

    Божественная пропорция

    Божественная пропорция (также известная как золотое сечение, золотая спираль, спираль Фибоначчи, золотой прямоугольник или Фи) приблизительно равна 1: 1.618. Это соотношение, которое встречается во всем мире природы, в соотношении различных вещей друг к другу. Размещение элементов по линиям, созданным Божественной пропорцией

    Если вы заинтересованы в разработке веб-сайтов в соответствии с золотым сечением, вы можете попробовать Золотую сетку, которая была создана с учетом этого соотношения.

    Правило третей

    Правило третей иногда путают с Божественной пропорцией, но это не одно и то же.Соотношение, представленное в Правиле третей, составляет 1: 1,667. В действительности же он может служить своего рода Божественной Пропорцией «ленивого человека». Чаще всего правило третей встречается в фотографии (многие камеры имеют встроенные сетки композиции, которые следуют этому правилу) и изобразительном искусстве, хотя его также часто можно увидеть в графическом и веб-дизайне.

    Ресурсов:

    Координатор

    Фокусная точка дает зрителям дизайн, на что можно смотреть. Он добавляет направленности дизайну и может служить точкой опоры для посетителей.В каждом дизайне должен быть какой-то фокус. Это может быть изображение, немного типографики, кнопка или что-то еще.

    Тщательно подумайте о том, на чем вы будете фокусироваться. Это должно иметь прямое отношение к цели вашего дизайна. Если цель вашего сайта — что-то продать, вы можете сделать так, чтобы ваш призыв к действию был в центре внимания дизайна. Если цель сайта — что-то еще, подумайте о том, что имеет смысл в качестве координационного центра по отношению к этой цели.

    Крупная типографика — очевидный фокус здесь:

    Теория сеток

    Сеточный дизайн, вероятно, один из самых знакомых шаблонов дизайна для многих графических и веб-дизайнеров.Сетки добавляют структуру и порядок дизайну и могут быть полезным методом для достижения хорошей пропорции между элементами в вашей работе.

    Существует огромное количество структур сетки (включая как фиксированные, так и подвижные сетки). Некоторые сайты, разработанные в рамках сетки, очевидно, основаны на сетке, в то время как другие более тонкие. В любом случае, однако, заранее заданная сетка может добавить к вашим проектам ощущение предварительной медитации, что сделает их более чистыми и изысканными.

    Сайт Oi Polloi — отличный пример очевидного дизайна сетки:

    Artworklove — еще один пример дизайна на основе сетки с очень конкретным вертикальным выравниванием:

    ресурсов

    Принципы гештальта

    Гештальт — немецкое слово, означающее «цельный».Что касается дизайна, это исследование поведенческих и психологических процессов людей и их визуального восприятия вещей. Другими словами, это набор научных принципов того, как визуальный дизайн чего-либо оказывает прямое психологическое воздействие на зрителя.

    Гештальт можно разбить на пять различных принципов: закрытие, сходство, близость, непрерывность и согласованность. Понимание и использование этих принципов может помочь вам более эффективно контролировать эмоциональные и интеллектуальные реакции людей на ваш дизайн.

    Закрытие

    Замыкание — это идея о том, что ваш мозг восполняет недостающие фрагменты изображения. Например, если пунктирная линия образует круг, ваш мозг распознает круг, даже если на нем отсутствуют большие участки. Простые формы и изображения распознать легче всего, но более сложные изображения также могут выиграть от закрытия, если они знакомы (например, лица).

    Эффективное использование закрытия заставляет зрителя чувствовать себя более вовлеченным в дизайн, поскольку он становится активным участником, а не просто наблюдателем.

    Сходство

    Когда представлено слишком много визуальной информации, мозг, естественно, пытается сгруппировать эту информацию, чтобы понять ее. Сходство — это идея о том, что эти группировки часто делаются на основе того, как что-то выглядит, независимо от какого-либо сходства за пределами внешнего вида.

    Есть несколько визуальных подсказок, которые помогают определить сходство между предметами: размер, форма и цвет — три наиболее распространенных.

    Окрестности

    Близость предметов — насколько они близки друг к другу — является важным психологическим индикатором взаимоотношений.Предметы, находящиеся в непосредственной близости, будут восприниматься как связанные более тесно, чем предметы, которые находятся дальше друг от друга.

    Близость может усилить или нейтрализовать сходство между предметами.

    Продолжение

    Непрерывность — это принцип, согласно которому, когда вы начинаете смотреть в каком-то направлении, вы продолжаете смотреть в том же направлении, пока что-то существенное не бросится в глаза. Есть несколько способов добиться непрерывности. Во-первых, если человек на изображении в вашем дизайне смотрит в определенном направлении, посетители вашего сайта будут смотреть в том же направлении.

    Пути на изображении также могут направлять взгляд в определенном направлении. Такие вещи, как дороги, деревья или другие похожие тропинки, все это привлекает внимание. Перспектива делает то же самое, направляя ваш взгляд на точку фокусировки.

    Continuance можно использовать, чтобы привлечь внимание посетителя к определенному элементу вашего веб-сайта.

    Выравнивание

    Выравнивание — настолько очевидный принцип композиции, что его часто упускают из виду. Но есть разные типы выравнивания, и каждый может использоваться для разных эффектов.

    Выравнивание краев — это когда фигуры или элементы выравниваются по краям. Выравнивание краев чаще всего наблюдается среди простых геометрических фигур, таких как прямоугольники или треугольники.

    Выравнивание по центру — это когда элементы выстраиваются по их осевым линиям. Этот тип выравнивания лучше работает с неправильными формами, хотя его можно использовать и с простыми геометрическими фигурами.

    Перекрывающиеся или вставленные элементы — еще один метод выравнивания, который часто встречается в дизайне (подумайте о макетах фотографий, где изображения накладываются друг на друга, как наиболее очевидный пример).

    Веб-сайт Saga — отличный пример выравнивания краев:

    Сайт Вероники Голдберг предлагает отличный пример центрированного выравнивания:

    Веб-сайт Giraffe имеет перекрывающиеся элементы в их сеточном дизайне:

    ресурсов

    Z Макет

    Компоновка «Z» основана на общих моделях движения глаз. Исследования айтрекинга показали, что люди обычно смотрят на веб-сайт или другой дизайн примерно по Z-образной схеме (начиная с верхнего левого угла, перемещаясь по экрану, сканируя в нижний левый угол, а затем снова читая вправо) .Поскольку это естественный узор, имеет смысл выровнять важные элементы вашего дизайна по этим линиям.

    Аналогичным узором является F-образная раскладка. Похожая концепция: люди сначала читают верхнюю строку, а затем продвигаются вниз по странице, сканируя меньше контента вправо по мере продвижения.

    Отличный пример Z-образной раскладки:

    Другой пример Z-образной формы:

    Сайт Backpage Football — хороший пример F-образного шаблона дизайна:

    ресурсов

    Заключение

    Создав прочный фундамент в графическом дизайне, включая глубокое понимание элементов и принципов графического дизайна, а также наиболее распространенных композиционных паттернов, вы лучше поймете, что составляет хороший дизайн.Ресурсы и пункты, обсуждаемые в этой серии, являются только отправной точкой, но они должны дать вам представление о том, чего не хватает вашим текущим знаниям и на что вам следует потратить время, чтобы узнать больше.

    (руб)

    .

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *